神经元限制性沉默因子对人胰岛素基因转录调控作用的研究
신경원한제성침묵인자대인이도소기인전록조공작용적연구
NRSF Plays a Regulatory Role in Human Insulin Gene Transcription
  • 万方数据
    生物化学与生物物理进展 생물화학여생물물리진전
    PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
    2007年 9期 952-959 ,共8页

    刘庆斌%李艳华%杨印祥%袁红丰%张锐%秦立蓬%吕洋%张赛男%孙迪金%陈琳%白慈贤%南雪%王韫芳%裴雪涛

    류경빈%리염화%양인상%원홍봉%장예%진립봉%려양%장새남%손적금%진림%백자현%남설%왕운방%배설도

    神经元限制性沉默因子(NRSF)%神经元限制性沉默元件(NRSE)%胰岛素%启动子 神經元限製性沉默因子(NRSF)%神經元限製性沉默元件(NRSE)%胰島素%啟動子
    신경원한제성침묵인자(NRSF)%신경원한제성침묵원건(NRSE)%이도소%계동자
    为了研究神经元限制性沉默因子(NRSF)调控神经元及胰岛细胞中神经特异性基因的表达,进一步寻找胰岛细胞中可能存在的其他NRSF调控基因.先用生物信息学手段对相关基因进行了分析.筛选及序列比对发现,人胰岛素核心启动子区有一段与NRSE相似的序列,提示,它可能受NRSF调控.构建了含NRSF基因的慢病毒载体,将其稳定转染于INS-1细胞.构建了3种荧光素酶报告载体:含有人胰岛素启动子-荧光素酶(hInsP-LUC)的慢病毒载体,pGL3-Basic载体和含有2拷贝NRSE样基序-荧光素酶(NRSE-LUC)的报告载体.利用稳定转染及瞬时转染实验观察NRSF对报告载体中荧光素酶活性的影响.利用电泳迁移率变动分析实验观察NRSE样基序与NRSF蛋白的结合情况,并通过竞争结合实验、引入特异性抗体实验证实探针与蛋白质结合的特异性.RT-PCR检测证实,感染空病毒的INS-1细胞不表达NRSF,感染含目的基因慢病毒的INS-1细胞能表达NRSF.将含有hInP-LUC的慢病毒载体稳定转染于上述2种细胞,荧光素酶活性分析结果显示,NRSF的过表达能明显降低胰岛素启动子的活性.瞬时转染hInsP-LUC报告系统于上述2种细胞,结果也显示NRSF能明显抑制胰岛素启动子-荧光素酶的活性.将含有NRSE-LUC的报告载体瞬时转染于上述2种细胞,结果表明过表达NRSF的INS-1细胞组的荧光素酶相对值比对照组有明显下降.电泳迁移率变动分析实验进一步证实,此NRSE样序列可以与NRSF蛋白特异结合,这种特异结合可以被标准的NRSE序列所竞争.结果表明,人胰岛素启动子中含有NRSE样序列,该序列通过与NRSF蛋白结合从而抑制人胰岛素启动子的转录活性.这一研究工作有助于进一步了解NRSF在胰岛细胞中的调控作用.
    위료연구신경원한제성침묵인자(NRSF)조공신경원급이도세포중신경특이성기인적표체,진일보심조이도세포중가능존재적기타NRSF조공기인.선용생물신식학수단대상관기인진행료분석.사선급서렬비대발현,인이도소핵심계동자구유일단여NRSE상사적서렬,제시,타가능수NRSF조공.구건료함NRSF기인적만병독재체,장기은정전염우INS-1세포.구건료3충형광소매보고재체:함유인이도소계동자-형광소매(hInsP-LUC)적만병독재체,pGL3-Basic재체화함유2고패NRSE양기서-형광소매(NRSE-LUC)적보고재체.이용은정전염급순시전염실험관찰NRSF대보고재체중형광소매활성적영향.이용전영천이솔변동분석실험관찰NRSE양기서여NRSF단백적결합정황,병통과경쟁결합실험、인입특이성항체실험증실탐침여단백질결합적특이성.RT-PCR검측증실,감염공병독적INS-1세포불표체NRSF,감염함목적기인만병독적INS-1세포능표체NRSF.장함유hInP-LUC적만병독재체은정전염우상술2충세포,형광소매활성분석결과현시,NRSF적과표체능명현강저이도소계동자적활성.순시전염hInsP-LUC보고계통우상술2충세포,결과야현시NRSF능명현억제이도소계동자-형광소매적활성.장함유NRSE-LUC적보고재체순시전염우상술2충세포,결과표명과표체NRSF적INS-1세포조적형광소매상대치비대조조유명현하강.전영천이솔변동분석실험진일보증실,차NRSE양서렬가이여NRSF단백특이결합,저충특이결합가이피표준적NRSE서렬소경쟁.결과표명,인이도소계동자중함유NRSE양서렬,해서렬통과여NRSF단백결합종이억제인이도소계동자적전록활성.저일연구공작유조우진일보료해NRSF재이도세포중적조공작용.
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