辐射研究与辐射工艺学报
輻射研究與輻射工藝學報
복사연구여복사공예학보
JOURNAL OF RADIATION RESEARCH AND RADIATION PROCESSING
2007年
5期
302-307
,共6页
高玲%李峰生%陈肖华%董波%张军权%饶亚岚%丛悦%毛秉智
高玲%李峰生%陳肖華%董波%張軍權%饒亞嵐%叢悅%毛秉智
고령%리봉생%진초화%동파%장군권%요아람%총열%모병지
小干扰RNA%白血病病毒致癌基因同源体2%U251细胞
小榦擾RNA%白血病病毒緻癌基因同源體2%U251細胞
소간우RNA%백혈병병독치암기인동원체2%U251세포
构建特异性抑制白血病病毒致癌基因同源体2(ErbB2)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,并检测联合60Coγ照射对U251细胞增殖抑制及促进凋亡作用.设计、合成ErbB2特异性的19bp短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到Psilence2.1-U6-H1载体中,构建ErbB2特异siRNA的表达载体,Hind Ⅲ和BamHI双酶切及测序鉴定重组体,并转染U251细胞,四甲基偶氮唑盐法(Methylthiazolyl tetrazolium assay,MTT)检测细胞增殖活性,Hoechst 33258染色,Annexin-Ⅴ检测细胞凋亡情况.经双酶切与测序鉴定成功构建ErbB2-siRNA表达载体,转染星型胶质瘤细胞株U251细胞可显著抑制细胞增殖活性(p＜0.05),并诱导细胞产生时间依赖性凋亡,24h凋亡细胞百分比增加10.52%,48h凋亡细胞百分比增加50.65%.联合60Coγ照射U251细胞增殖活性较单独转染进一步显著降低(p＜0.05).运用Psilence2.1-U6-H1载体构建的ErbB2-siRNA表达载体可有效抑制U251细胞增殖并促进时间依赖性细胞凋亡;联合60Coγ照射可增加增殖抑制效果.
構建特異性抑製白血病病毒緻癌基因同源體2(ErbB2)的小榦擾RNA(siRNA)錶達載體,併檢測聯閤60Coγ照射對U251細胞增殖抑製及促進凋亡作用.設計、閤成ErbB2特異性的19bp短鏈寡覈苷痠,經退火形成雙鏈DNA片段,剋隆到Psilence2.1-U6-H1載體中,構建ErbB2特異siRNA的錶達載體,Hind Ⅲ和BamHI雙酶切及測序鑒定重組體,併轉染U251細胞,四甲基偶氮唑鹽法(Methylthiazolyl tetrazolium assay,MTT)檢測細胞增殖活性,Hoechst 33258染色,Annexin-Ⅴ檢測細胞凋亡情況.經雙酶切與測序鑒定成功構建ErbB2-siRNA錶達載體,轉染星型膠質瘤細胞株U251細胞可顯著抑製細胞增殖活性(p＜0.05),併誘導細胞產生時間依賴性凋亡,24h凋亡細胞百分比增加10.52%,48h凋亡細胞百分比增加50.65%.聯閤60Coγ照射U251細胞增殖活性較單獨轉染進一步顯著降低(p＜0.05).運用Psilence2.1-U6-H1載體構建的ErbB2-siRNA錶達載體可有效抑製U251細胞增殖併促進時間依賴性細胞凋亡;聯閤60Coγ照射可增加增殖抑製效果.
구건특이성억제백혈병병독치암기인동원체2(ErbB2)적소간우RNA(siRNA)표체재체,병검측연합60Coγ조사대U251세포증식억제급촉진조망작용.설계、합성ErbB2특이성적19bp단련과핵감산,경퇴화형성쌍련DNA편단,극륭도Psilence2.1-U6-H1재체중,구건ErbB2특이siRNA적표체재체,Hind Ⅲ화BamHI쌍매절급측서감정중조체,병전염U251세포,사갑기우담서염법(Methylthiazolyl tetrazolium assay,MTT)검측세포증식활성,Hoechst 33258염색,Annexin-Ⅴ검측세포조망정황.경쌍매절여측서감정성공구건ErbB2-siRNA표체재체,전염성형효질류세포주U251세포가현저억제세포증식활성(p＜0.05),병유도세포산생시간의뢰성조망,24h조망세포백분비증가10.52%,48h조망세포백분비증가50.65%.연합60Coγ조사U251세포증식활성교단독전염진일보현저강저(p＜0.05).운용Psilence2.1-U6-H1재체구건적ErbB2-siRNA표체재체가유효억제U251세포증식병촉진시간의뢰성세포조망;연합60Coγ조사가증가증식억제효과.
