医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2007年
7期
682-684,688,后插3
,共5页
王淑芳%李青%姚丽%程虹%张静%叶菁%李繁烦%李南林
王淑芳%李青%姚麗%程虹%張靜%葉菁%李繁煩%李南林
왕숙방%리청%요려%정홍%장정%협정%리번번%리남림
人诱导细胞死亡的DFF45样效应因子3%基因克隆%真核表达%凋亡
人誘導細胞死亡的DFF45樣效應因子3%基因剋隆%真覈錶達%凋亡
인유도세포사망적DFF45양효응인자3%기인극륭%진핵표체%조망
目的:克隆人诱导细胞死亡的DFF45样效应因子3(CIDE3)全长基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CIDE3,并检测其促凋亡作用.方法:①提取人腹部皮下白色脂肪组织的总RNA,经RT-PCR获得CIDE3全长基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1(+)-CIDE3,并进行序列测定.②用脂质体法将pcDNA3.1(+)-CIDE3转染人宫颈癌细胞系HeLa细胞,通过TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:①经RT-PCR扩增得到特异性717 bp的目的片段,构建的重组质粒pcDNA3.1(+)-CIDE3经序列测定,结果与Genbank发表的序列完全一致.②转染Hela细胞后,经Tunel染色法检测发现,转染pcDNA3.1(+)-CIDE3后有大约25%的细胞发生了凋亡,与转染空质粒pcDNA3.1(+)(＜5%)及未转染质粒的细胞相比,其凋亡细胞明显增多.结论:成功克隆了人CIDE3全长基因,构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CIDE3,并验证了CIDE3基因可诱导细胞发生凋亡的生物学作用,为进一步研究CIDE3的生物学功能奠定了坚实基础.
目的:剋隆人誘導細胞死亡的DFF45樣效應因子3(CIDE3)全長基因,構建真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)-CIDE3,併檢測其促凋亡作用.方法:①提取人腹部皮下白色脂肪組織的總RNA,經RT-PCR穫得CIDE3全長基因,剋隆入真覈錶達載體pcDNA3.1(+),構建重組質粒pcDNA3.1(+)-CIDE3,併進行序列測定.②用脂質體法將pcDNA3.1(+)-CIDE3轉染人宮頸癌細胞繫HeLa細胞,通過TUNEL法檢測細胞凋亡情況.結果:①經RT-PCR擴增得到特異性717 bp的目的片段,構建的重組質粒pcDNA3.1(+)-CIDE3經序列測定,結果與Genbank髮錶的序列完全一緻.②轉染Hela細胞後,經Tunel染色法檢測髮現,轉染pcDNA3.1(+)-CIDE3後有大約25%的細胞髮生瞭凋亡,與轉染空質粒pcDNA3.1(+)(＜5%)及未轉染質粒的細胞相比,其凋亡細胞明顯增多.結論:成功剋隆瞭人CIDE3全長基因,構建瞭真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)-CIDE3,併驗證瞭CIDE3基因可誘導細胞髮生凋亡的生物學作用,為進一步研究CIDE3的生物學功能奠定瞭堅實基礎.
목적:극륭인유도세포사망적DFF45양효응인자3(CIDE3)전장기인,구건진핵표체질립pcDNA3.1(+)-CIDE3,병검측기촉조망작용.방법:①제취인복부피하백색지방조직적총RNA,경RT-PCR획득CIDE3전장기인,극륭입진핵표체재체pcDNA3.1(+),구건중조질립pcDNA3.1(+)-CIDE3,병진행서렬측정.②용지질체법장pcDNA3.1(+)-CIDE3전염인궁경암세포계HeLa세포,통과TUNEL법검측세포조망정황.결과:①경RT-PCR확증득도특이성717 bp적목적편단,구건적중조질립pcDNA3.1(+)-CIDE3경서렬측정,결과여Genbank발표적서렬완전일치.②전염Hela세포후,경Tunel염색법검측발현,전염pcDNA3.1(+)-CIDE3후유대약25%적세포발생료조망,여전염공질립pcDNA3.1(+)(＜5%)급미전염질립적세포상비,기조망세포명현증다.결론:성공극륭료인CIDE3전장기인,구건료진핵표체질립pcDNA3.1(+)-CIDE3,병험증료CIDE3기인가유도세포발생조망적생물학작용,위진일보연구CIDE3적생물학공능전정료견실기출.
