贵州医药
貴州醫藥
귀주의약
GUIZHOU MEDICAL JOURNAL
2006年
6期
486-489
,共4页
结核分枝杆菌%细菌L型%利福平%耐药性%rpoB基因
結覈分枝桿菌%細菌L型%利福平%耐藥性%rpoB基因
결핵분지간균%세균L형%리복평%내약성%rpoB기인
目的探讨细胞壁缺陷结核分枝杆菌形成利福平耐药性的分子机制.方法将结核分枝杆菌分别接种于含利福平与不含利福平的非高渗透压液体培养基内培养,逐日在倒置显微镜下观察L型的形成情况.L型形成和生长后,滤过培养物分离L型,在不含诱导剂的非高渗液体培养基内传代培养获得L型纯培养物.用结核分枝杆菌利福平耐药性相关基因(rpoB基因)引物分别对自发形成的稳定L型及诱导形成的稳定L型的染色体DNA进行PCR扩增,扩增产物分别以琼脂糖凝胶电泳及PCR-DS方法进行检测和分析.结果结核分枝杆菌既可在非高渗透压培养基内自发形成细胞壁缺陷细菌并成为稳定L型,也可在最低抑菌浓度的利福平作用下发生细胞壁缺陷并成为稳定L型.PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳可见自发形成和诱导形成的稳定L型均形成与其亲代细菌型一致的DNA条带,序列分析显示具有与其亲代细菌型相同的碱基序列.结论结核分枝杆菌在非高渗透压培养基内既可以自发地形成L型,也可以被利福平诱导形成L型.结核分枝杆菌稳定L型具有明显的利福平耐药性,但其相关rpoB基因并没有发生突变.提示结核分枝杆菌的利福平耐药性变异不一定同rpoB基因突变有关,细胞壁缺陷也是导致结核分枝杆菌形成利福平耐药性的一个重要机制.
目的探討細胞壁缺陷結覈分枝桿菌形成利福平耐藥性的分子機製.方法將結覈分枝桿菌分彆接種于含利福平與不含利福平的非高滲透壓液體培養基內培養,逐日在倒置顯微鏡下觀察L型的形成情況.L型形成和生長後,濾過培養物分離L型,在不含誘導劑的非高滲液體培養基內傳代培養穫得L型純培養物.用結覈分枝桿菌利福平耐藥性相關基因(rpoB基因)引物分彆對自髮形成的穩定L型及誘導形成的穩定L型的染色體DNA進行PCR擴增,擴增產物分彆以瓊脂糖凝膠電泳及PCR-DS方法進行檢測和分析.結果結覈分枝桿菌既可在非高滲透壓培養基內自髮形成細胞壁缺陷細菌併成為穩定L型,也可在最低抑菌濃度的利福平作用下髮生細胞壁缺陷併成為穩定L型.PCR擴增產物瓊脂糖凝膠電泳可見自髮形成和誘導形成的穩定L型均形成與其親代細菌型一緻的DNA條帶,序列分析顯示具有與其親代細菌型相同的堿基序列.結論結覈分枝桿菌在非高滲透壓培養基內既可以自髮地形成L型,也可以被利福平誘導形成L型.結覈分枝桿菌穩定L型具有明顯的利福平耐藥性,但其相關rpoB基因併沒有髮生突變.提示結覈分枝桿菌的利福平耐藥性變異不一定同rpoB基因突變有關,細胞壁缺陷也是導緻結覈分枝桿菌形成利福平耐藥性的一箇重要機製.
목적탐토세포벽결함결핵분지간균형성리복평내약성적분자궤제.방법장결핵분지간균분별접충우함리복평여불함리복평적비고삼투압액체배양기내배양,축일재도치현미경하관찰L형적형성정황.L형형성화생장후,려과배양물분리L형,재불함유도제적비고삼액체배양기내전대배양획득L형순배양물.용결핵분지간균리복평내약성상관기인(rpoB기인)인물분별대자발형성적은정L형급유도형성적은정L형적염색체DNA진행PCR확증,확증산물분별이경지당응효전영급PCR-DS방법진행검측화분석.결과결핵분지간균기가재비고삼투압배양기내자발형성세포벽결함세균병성위은정L형,야가재최저억균농도적리복평작용하발생세포벽결함병성위은정L형.PCR확증산물경지당응효전영가견자발형성화유도형성적은정L형균형성여기친대세균형일치적DNA조대,서렬분석현시구유여기친대세균형상동적감기서렬.결론결핵분지간균재비고삼투압배양기내기가이자발지형성L형,야가이피리복평유도형성L형.결핵분지간균은정L형구유명현적리복평내약성,단기상관rpoB기인병몰유발생돌변.제시결핵분지간균적리복평내약성변이불일정동rpoB기인돌변유관,세포벽결함야시도치결핵분지간균형성리복평내약성적일개중요궤제.
