CAJ | 학술논문

以天然高表达膜型B7-2分子的人恶性B淋巴瘤经胞株Daudi和B7-2基因转染细胞株L929-B7-2为免疫原及检测细胞株,采用B细胞杂交瘤技术建立了1株稳定分泌抗人B7-2单抗的杂交瘤,命名为6A5.快速定性试纸法鉴定6A5属小鼠IgG1亚类.经体内诱生腹水法制备单抗,小鼠腹水形成的阳性率为80%,腹水的收获量平均为5.9 ml/只小鼠.经免疫亲和层析法纯化,腹水中抗体蛋白的得率为1.1 mg/ml.采用间接免疫荧光法及流式细胞仪分析,单抗6A5与L929-B7-2、PBTC、Raji和Daudi的阳性结合率分别为99.9%、4.6%、90.6%和99.1%.将6A5(终浓度为5 μg/ml)加入到Daudi细胞的培养体系中,经显微镜观察及MTT法分析,6A5对Daudi细胞的生长在24 h内具有抑制作用(P＜0.05).以丝裂霉素处理的L929-B7-2为刺激细胞,PBTC为反应细胞,加入6A5共同培养.经MTT法分析,6A5能阻断B7-2介导的协同刺激信号,抑制PBTC增殖(P＜0.05).提示6A5是一株功能性抗体,在B7-2分子相关的基础和应用研究中具有重要的价值.
이천연고표체막형B7-2분자적인악성B림파류경포주Daudi화B7-2기인전염세포주L929-B7-2위면역원급검측세포주,채용B세포잡교류기술건립료1주은정분비항인B7-2단항적잡교류,명명위6A5.쾌속정성시지법감정6A5속소서IgG1아류.경체내유생복수법제비단항,소서복수형성적양성솔위80%,복수적수획량평균위5.9 ml/지소서.경면역친화층석법순화,복수중항체단백적득솔위1.1 mg/ml.채용간접면역형광법급류식세포의분석,단항6A5여L929-B7-2、PBTC、Raji화Daudi적양성결합솔분별위99.9%、4.6%、90.6%화99.1%.장6A5(종농도위5 μg/ml)가입도Daudi세포적배양체계중,경현미경관찰급MTT법분석,6A5대Daudi세포적생장재24 h내구유억제작용(P＜0.05).이사렬매소처리적L929-B7-2위자격세포,PBTC위반응세포,가입6A5공동배양.경MTT법분석,6A5능조단B7-2개도적협동자격신호,억제PBTC증식(P＜0.05).제시6A5시일주공능성항체,재B7-2분자상관적기출화응용연구중구유중요적개치.