HIV-1 HXB2株蛋白酶在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定
HIV-1 HXB2주단백매재대장간균중적표체、순화급감정
Expression of Protease of HIV-1 HXB2 Subtype in E. Coli and Purification and Identification of Expressed Product
  • 万方数据
    中国生物制品学杂志 중국생물제품학잡지
    CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
    2006年 2期 108-112 ,共5页

    贾建安%周波%钱宝华%蒋少华%陈秋莉%潘欣%赵平%任浩%温宗梅%邓松华%卢洪洲%潘卫

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    人免疫缺陷病毒%蛋白酶%基因表达 人免疫缺陷病毒%蛋白酶%基因錶達
    인면역결함병독%단백매%기인표체
    目的原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(Protease,PR),用于对HIV-1 Gag P2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选.方法根据HIV-1 HXB2株PR DNA序列设计引物,用重叠延伸PCR方法合成使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1 PR的DNA编码序列,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体进行测序.将HIV-1 PR DNA克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中进行诱导表达,用Ni-NTA亲和柱对表达蛋白进行纯化,SDS-PAGE鉴定,并用HIV阳性血清进行免疫反应性的鉴定.结果合成的使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经测序显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致.所构建的HIV-1 PR原核表达质粒pQE30-pr,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为14 000的HIV-1 PR蛋白,纯化的目的蛋白浓度为7.74 mg/ml.ELISA检测该蛋白与HIV阳性血清呈特异性反应.结论已成功合成并克隆了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1 PR的DNA编码序列,经表达及纯化的HIV-1 PR蛋白具有免疫学特性.
    목적원핵표체、순화HIV-1형HXB2주단백매(Protease,PR),용우대HIV-1 Gag P2/NC단백매절할위점서렬수궤돌변적서균체전시문고적절할사선.방법근거HIV-1 HXB2주PR DNA서렬설계인물,용중첩연신PCR방법합성사용대장간균편호밀마자적HIV-1 PR적DNA편마서렬,용T/A극륭법장기삽입pMD18-T재체진행측서.장HIV-1 PR DNA극륭지원핵표체재체pQE30,재대장간균M15중진행유도표체,용Ni-NTA친화주대표체단백진행순화,SDS-PAGE감정,병용HIV양성혈청진행면역반응성적감정.결과합성적사용대장간균편호밀마자적HIV-1PR적DNA편마서렬,경측서현시기편마안기산서렬여원시서렬완전일치.소구건적HIV-1 PR원핵표체질립pQE30-pr,경IPTG유도후,표체출상대분자질량위14 000적HIV-1 PR단백,순화적목적단백농도위7.74 mg/ml.ELISA검측해단백여HIV양성혈청정특이성반응.결론이성공합성병극륭료사용대장간균편호밀마자적HIV-1 PR적DNA편마서렬,경표체급순화적HIV-1 PR단백구유면역학특성.
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