农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2005年
4期
452-455
,共4页
孙丽翠%王雅梅%闫豫东%张静宜%司杨%王民%祁雅慧
孫麗翠%王雅梅%閆豫東%張靜宜%司楊%王民%祁雅慧
손려취%왕아매%염예동%장정의%사양%왕민%기아혜
人IGF-1基因%重组杆状病毒载体%sf9细胞
人IGF-1基因%重組桿狀病毒載體%sf9細胞
인IGF-1기인%중조간상병독재체%sf9세포
以pcDNA3.1/IGF-1为模板,采用PCR方法对IGF-1基因进行扩增,EcoRⅠ和SalⅠ酶切回收含IGF-1基因的DNA片段,与pFastHTA连接,获得重组载体pFast/IGF-1;将其转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH10Bac感受态细胞,经卡那霉素、四环素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-IGF-1,PCR鉴定得到单一IGF-1条带.将该病毒载体转染sf9细胞,进行病毒重组,Western-blot检测IGF-1表达,并用MTT法检测促内皮细胞生长活性.结果成功获得了重组病毒,Western-blot检测出现1条约13.0 kD的带,MTT法检测IGF-1促细胞生长率为24.4%.
以pcDNA3.1/IGF-1為模闆,採用PCR方法對IGF-1基因進行擴增,EcoRⅠ和SalⅠ酶切迴收含IGF-1基因的DNA片段,與pFastHTA連接,穫得重組載體pFast/IGF-1;將其轉化大腸桿菌(Escherichia coli)DH10Bac感受態細胞,經卡那黴素、四環素、慶大黴素及藍白斑篩選得到重組桿狀病毒載體pBacmid-Fa-IGF-1,PCR鑒定得到單一IGF-1條帶.將該病毒載體轉染sf9細胞,進行病毒重組,Western-blot檢測IGF-1錶達,併用MTT法檢測促內皮細胞生長活性.結果成功穫得瞭重組病毒,Western-blot檢測齣現1條約13.0 kD的帶,MTT法檢測IGF-1促細胞生長率為24.4%.
이pcDNA3.1/IGF-1위모판,채용PCR방법대IGF-1기인진행확증,EcoRⅠ화SalⅠ매절회수함IGF-1기인적DNA편단,여pFastHTA련접,획득중조재체pFast/IGF-1;장기전화대장간균(Escherichia coli)DH10Bac감수태세포,경잡나매소、사배소、경대매소급람백반사선득도중조간상병독재체pBacmid-Fa-IGF-1,PCR감정득도단일IGF-1조대.장해병독재체전염sf9세포,진행병독중조,Western-blot검측IGF-1표체,병용MTT법검측촉내피세포생장활성.결과성공획득료중조병독,Western-blot검측출현1조약13.0 kD적대,MTT법검측IGF-1촉세포생장솔위24.4%.
