遗传学报
遺傳學報
유전학보
ACTA GENETICA SINICA
2004年
2期
151-158
,共8页
逄越%袁晓东%汤敏谦%李庆伟
逄越%袁曉東%湯敏謙%李慶偉
방월%원효동%탕민겸%리경위
转录起始点%鸡卵清蛋白基因%启动子%绿色荧光蛋白(GFP)
轉錄起始點%鷄卵清蛋白基因%啟動子%綠色熒光蛋白(GFP)
전록기시점%계란청단백기인%계동자%록색형광단백(GFP)
采用5′RACE方法确定鸡卵清蛋白基因转录起始点的位置,通过序列分析得出转录起始点为G,从而确定出核心启动子及上游调控区的位置.应用PCR技术分别扩增两段卵清蛋白基因上游调控序列的两个片段,长度分别为1.5kb和2.9 kb.经PCR测序和克隆测序后,针对突变的碱基进行修复,并将修复的两片段分别连接在带有绿色荧光蛋白报告基因pGFP-N2载体上,为使pGFP-N2载体本身的CMV启动子不影响对鸡卵清蛋白启动子的研究,将其切去,构建了P1.5koval-GFP和P2.9koval-GFP两种表达载体,经酶切鉴定这两种表达载体构建正确.
採用5′RACE方法確定鷄卵清蛋白基因轉錄起始點的位置,通過序列分析得齣轉錄起始點為G,從而確定齣覈心啟動子及上遊調控區的位置.應用PCR技術分彆擴增兩段卵清蛋白基因上遊調控序列的兩箇片段,長度分彆為1.5kb和2.9 kb.經PCR測序和剋隆測序後,針對突變的堿基進行脩複,併將脩複的兩片段分彆連接在帶有綠色熒光蛋白報告基因pGFP-N2載體上,為使pGFP-N2載體本身的CMV啟動子不影響對鷄卵清蛋白啟動子的研究,將其切去,構建瞭P1.5koval-GFP和P2.9koval-GFP兩種錶達載體,經酶切鑒定這兩種錶達載體構建正確.
채용5′RACE방법학정계란청단백기인전록기시점적위치,통과서렬분석득출전록기시점위G,종이학정출핵심계동자급상유조공구적위치.응용PCR기술분별확증량단란청단백기인상유조공서렬적량개편단,장도분별위1.5kb화2.9 kb.경PCR측서화극륭측서후,침대돌변적감기진행수복,병장수복적량편단분별련접재대유록색형광단백보고기인pGFP-N2재체상,위사pGFP-N2재체본신적CMV계동자불영향대계란청단백계동자적연구,장기절거,구건료P1.5koval-GFP화P2.9koval-GFP량충표체재체,경매절감정저량충표체재체구건정학.
