微生物学通报
微生物學通報
미생물학통보
MICROBIOLOGY
2004年
2期
37-40
,共4页
刘玉良%吴艳涛%黄勇%邵卫星%韦栋平%刘秀梵
劉玉良%吳豔濤%黃勇%邵衛星%韋棟平%劉秀梵
류옥량%오염도%황용%소위성%위동평%류수범
鹅,新城疫病毒,NP、P和L基因,绿色荧光蛋白,表达
鵝,新城疫病毒,NP、P和L基因,綠色熒光蛋白,錶達
아,신성역병독,NP、P화L기인,록색형광단백,표체
将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT-PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM-T easy载体,再分别亚克隆到真核表达载体pCI-neo上,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确.利用P基因开放性阅读框(ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点,将报告基因绿色荧光蛋白(GFP)基因克隆进P基因真核表达重组质粒,分别转染COS-1细胞和CEF细胞,在倒置荧光显微镜下可见到绿色荧光,表明GFP基因已得到表达,由此证明P基因也已得到表达.鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆成功,为即将进行的鹅源新城疫病毒的反向遗传操作以及功能基因组研究打下基础.
將鵝源新城疫病毒的NP、P和L基因通過RT-PCR方法從尿囊液中擴增後分彆剋隆進pGEM-T easy載體,再分彆亞剋隆到真覈錶達載體pCI-neo上,通過酶切、PCR和測序驗證剋隆正確.利用P基因開放性閱讀框(ORF)上靠近終止密碼上遊的AgeI位點,將報告基因綠色熒光蛋白(GFP)基因剋隆進P基因真覈錶達重組質粒,分彆轉染COS-1細胞和CEF細胞,在倒置熒光顯微鏡下可見到綠色熒光,錶明GFP基因已得到錶達,由此證明P基因也已得到錶達.鵝源新城疫病毒NP、P和L基因的剋隆成功,為即將進行的鵝源新城疫病毒的反嚮遺傳操作以及功能基因組研究打下基礎.
장아원신성역병독적NP、P화L기인통과RT-PCR방법종뇨낭액중확증후분별극륭진pGEM-T easy재체,재분별아극륭도진핵표체재체pCI-neo상,통과매절、PCR화측서험증극륭정학.이용P기인개방성열독광(ORF)상고근종지밀마상유적AgeI위점,장보고기인록색형광단백(GFP)기인극륭진P기인진핵표체중조질립,분별전염COS-1세포화CEF세포,재도치형광현미경하가견도록색형광,표명GFP기인이득도표체,유차증명P기인야이득도표체.아원신성역병독NP、P화L기인적극륭성공,위즉장진행적아원신성역병독적반향유전조작이급공능기인조연구타하기출.
