中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2003年
5期
332-335
,共4页
韩苇%赵宁%石继宏%颜真%张英起
韓葦%趙寧%石繼宏%顏真%張英起
한위%조저%석계굉%안진%장영기
新型TNF-α%鸡卵清溶菌酶%T辅助细胞表位序列%免疫抑制剂
新型TNF-α%鷄卵清溶菌酶%T輔助細胞錶位序列%免疫抑製劑
신형TNF-α%계란청용균매%T보조세포표위서렬%면역억제제
目的:用鸡卵清溶菌酶(hen egg-white lysozyme,HEL)T辅助细胞表位序列替换新型rhTNF-α3'末端序列,构建和表达新型rhTNF-α免疫抑制剂.方法:克隆、表达、纯化和鉴定新型rhTNF-α免疫抑制剂.结果:DNA测序表明,重组新型hTNF-αHEL的3'末端序列与设计序列完全相同.将其转移到pBV220表达载体中,重组菌经42℃诱导后做SDS-PAGE分析,结果显示该重组体获得了表达,其表达量为菌体总蛋白量的30%,表达形式为包涵体,对该包涵体进行溶解和复性,再经阴离子交换柱纯化,获得的重组蛋白的纯度可达90%以上.免疫印迹鉴定结果证实,该表达蛋白可与抗TNF-α抗体产生免疫反应.体外杀伤活性检测显示,该蛋白已完全丧失了新型TNF-α的体外杀伤活性.结论:上述实验证实,新型rhTNF-α免疫抑制剂构建成功,该免疫抑制剂既保持了与TNF-α抗体结合的能力又失去了TNF-α的杀伤活性,为其下一步治疗作用的研究打下了基础.
目的:用鷄卵清溶菌酶(hen egg-white lysozyme,HEL)T輔助細胞錶位序列替換新型rhTNF-α3'末耑序列,構建和錶達新型rhTNF-α免疫抑製劑.方法:剋隆、錶達、純化和鑒定新型rhTNF-α免疫抑製劑.結果:DNA測序錶明,重組新型hTNF-αHEL的3'末耑序列與設計序列完全相同.將其轉移到pBV220錶達載體中,重組菌經42℃誘導後做SDS-PAGE分析,結果顯示該重組體穫得瞭錶達,其錶達量為菌體總蛋白量的30%,錶達形式為包涵體,對該包涵體進行溶解和複性,再經陰離子交換柱純化,穫得的重組蛋白的純度可達90%以上.免疫印跡鑒定結果證實,該錶達蛋白可與抗TNF-α抗體產生免疫反應.體外殺傷活性檢測顯示,該蛋白已完全喪失瞭新型TNF-α的體外殺傷活性.結論:上述實驗證實,新型rhTNF-α免疫抑製劑構建成功,該免疫抑製劑既保持瞭與TNF-α抗體結閤的能力又失去瞭TNF-α的殺傷活性,為其下一步治療作用的研究打下瞭基礎.
목적:용계란청용균매(hen egg-white lysozyme,HEL)T보조세포표위서렬체환신형rhTNF-α3'말단서렬,구건화표체신형rhTNF-α면역억제제.방법:극륭、표체、순화화감정신형rhTNF-α면역억제제.결과:DNA측서표명,중조신형hTNF-αHEL적3'말단서렬여설계서렬완전상동.장기전이도pBV220표체재체중,중조균경42℃유도후주SDS-PAGE분석,결과현시해중조체획득료표체,기표체량위균체총단백량적30%,표체형식위포함체,대해포함체진행용해화복성,재경음리자교환주순화,획득적중조단백적순도가체90%이상.면역인적감정결과증실,해표체단백가여항TNF-α항체산생면역반응.체외살상활성검측현시,해단백이완전상실료신형TNF-α적체외살상활성.결론:상술실험증실,신형rhTNF-α면역억제제구건성공,해면역억제제기보지료여TNF-α항체결합적능력우실거료TNF-α적살상활성,위기하일보치료작용적연구타하료기출.
