第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2003年
6期
495-498
,共4页
李树钧%戚好文%叶江枫%帝新宇%季少平%何鹏%张英起%药立波
李樹鈞%慼好文%葉江楓%帝新宇%季少平%何鵬%張英起%藥立波
리수균%척호문%협강풍%제신우%계소평%하붕%장영기%약립파
趋化因子%嗜酸粒细胞%基因表达%遗传载体
趨化因子%嗜痠粒細胞%基因錶達%遺傳載體
추화인자%기산립세포%기인표체%유전재체
目的: 为研究MIP4(巨噬细胞炎性蛋白4)的突变体在拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用中的活性,构建MIP4突变体(Met-MIP4)并进行原核表达和纯化,体外观察其拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用. 方法: 将Met-MIP4基因片段插入到pRSET-A融合表达载体中.诱导表达后,表达工程菌经超声裂菌后鉴定可溶性,细菌裂解上清经镍螯合亲和层析纯化.采用葡聚糖沉淀法分离和纯化嗜酸粒细胞,利用24孔Transwell双层板鉴定融合表达蛋白的趋化和抗趋化活性.结果: 构建入融合表达载体pRSET A的基因在大肠杆菌中得到表达.裂菌后鉴定显示融合蛋白可溶部分占80%,经镍螯合亲和层析纯化后纯度达87%.分离的嗜酸粒细胞纯度达到90%.拮抗嗜酸粒细胞趋化活性实验表明,纯化的Met-MIP4蛋白具有明显拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用.结论: Met-MIP4突变体基因在pRSET A融合表达载体中获得可溶性表达和纯化,生物学活性实验表明融合的pRSET-Met-MIP4蛋白具有拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用的活性, 为进一步开发其临床应用奠定了基础.
目的: 為研究MIP4(巨噬細胞炎性蛋白4)的突變體在拮抗嗜痠粒細胞的趨化作用中的活性,構建MIP4突變體(Met-MIP4)併進行原覈錶達和純化,體外觀察其拮抗嗜痠粒細胞的趨化作用. 方法: 將Met-MIP4基因片段插入到pRSET-A融閤錶達載體中.誘導錶達後,錶達工程菌經超聲裂菌後鑒定可溶性,細菌裂解上清經鎳螯閤親和層析純化.採用葡聚糖沉澱法分離和純化嗜痠粒細胞,利用24孔Transwell雙層闆鑒定融閤錶達蛋白的趨化和抗趨化活性.結果: 構建入融閤錶達載體pRSET A的基因在大腸桿菌中得到錶達.裂菌後鑒定顯示融閤蛋白可溶部分佔80%,經鎳螯閤親和層析純化後純度達87%.分離的嗜痠粒細胞純度達到90%.拮抗嗜痠粒細胞趨化活性實驗錶明,純化的Met-MIP4蛋白具有明顯拮抗嗜痠粒細胞的趨化作用.結論: Met-MIP4突變體基因在pRSET A融閤錶達載體中穫得可溶性錶達和純化,生物學活性實驗錶明融閤的pRSET-Met-MIP4蛋白具有拮抗嗜痠粒細胞的趨化作用的活性, 為進一步開髮其臨床應用奠定瞭基礎.
목적: 위연구MIP4(거서세포염성단백4)적돌변체재길항기산립세포적추화작용중적활성,구건MIP4돌변체(Met-MIP4)병진행원핵표체화순화,체외관찰기길항기산립세포적추화작용. 방법: 장Met-MIP4기인편단삽입도pRSET-A융합표체재체중.유도표체후,표체공정균경초성렬균후감정가용성,세균렬해상청경얼오합친화층석순화.채용포취당침정법분리화순화기산립세포,이용24공Transwell쌍층판감정융합표체단백적추화화항추화활성.결과: 구건입융합표체재체pRSET A적기인재대장간균중득도표체.렬균후감정현시융합단백가용부분점80%,경얼오합친화층석순화후순도체87%.분리적기산립세포순도체도90%.길항기산립세포추화활성실험표명,순화적Met-MIP4단백구유명현길항기산립세포적추화작용.결론: Met-MIP4돌변체기인재pRSET A융합표체재체중획득가용성표체화순화,생물학활성실험표명융합적pRSET-Met-MIP4단백구유길항기산립세포적추화작용적활성, 위진일보개발기림상응용전정료기출.
