现代预防医学
現代預防醫學
현대예방의학
MODERN PREVENTIVE MEDICINE
2003年
4期
473-474
,共2页
俞慕华%陈昭斌%黄锐敏%段永翔%陈辉%叶友松%詹希美
俞慕華%陳昭斌%黃銳敏%段永翔%陳輝%葉友鬆%詹希美
유모화%진소빈%황예민%단영상%진휘%협우송%첨희미
腮腺炎病毒%RT-PCR%电转化%表达载体
腮腺炎病毒%RT-PCR%電轉化%錶達載體
시선염병독%RT-PCR%전전화%표체재체
目的:构建抗腮腺炎病毒抗体轻链基因重组表达载体.方法:从腮腺炎患者和腮腺炎抗体IgG阳性正常人群的淋巴细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA.用相应的引物进行PCR,扩增出轻链κ和λ基因,经Sac I和Xba I双酶切后,分别和噬粒载体pCornb3连接,再经电穿孔转化大肠杆菌XL1-blue菌株,将轻链基因克隆入载体pComb3.结果:从分离出的淋巴细胞中共提取高质量RNA约110μg,经逆转录、PCR,分别扩增出约700bp大小的κ和λ基因.PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接,在2.5kv,200Ω,25μF的条件下电转化,转化率为:4.14×107,随机挑取10个菌落进行PCR鉴定,共有6个克隆扩增出κ基因,1个克隆扩增出λ基因,轻链重组率为70%.结论:获得的抗体轻链基因重组表达载体是高效、实用的,为下一步构建抗体Fab段基因重组载体打下了良好的基础.
目的:構建抗腮腺炎病毒抗體輕鏈基因重組錶達載體.方法:從腮腺炎患者和腮腺炎抗體IgG暘性正常人群的淋巴細胞中提取總RNA,逆轉錄成cDNA.用相應的引物進行PCR,擴增齣輕鏈κ和λ基因,經Sac I和Xba I雙酶切後,分彆和噬粒載體pCornb3連接,再經電穿孔轉化大腸桿菌XL1-blue菌株,將輕鏈基因剋隆入載體pComb3.結果:從分離齣的淋巴細胞中共提取高質量RNA約110μg,經逆轉錄、PCR,分彆擴增齣約700bp大小的κ和λ基因.PCR產物和載體經純化、雙酶切後進行連接,在2.5kv,200Ω,25μF的條件下電轉化,轉化率為:4.14×107,隨機挑取10箇菌落進行PCR鑒定,共有6箇剋隆擴增齣κ基因,1箇剋隆擴增齣λ基因,輕鏈重組率為70%.結論:穫得的抗體輕鏈基因重組錶達載體是高效、實用的,為下一步構建抗體Fab段基因重組載體打下瞭良好的基礎.
목적:구건항시선염병독항체경련기인중조표체재체.방법:종시선염환자화시선염항체IgG양성정상인군적림파세포중제취총RNA,역전록성cDNA.용상응적인물진행PCR,확증출경련κ화λ기인,경Sac I화Xba I쌍매절후,분별화서립재체pCornb3련접,재경전천공전화대장간균XL1-blue균주,장경련기인극륭입재체pComb3.결과:종분리출적림파세포중공제취고질량RNA약110μg,경역전록、PCR,분별확증출약700bp대소적κ화λ기인.PCR산물화재체경순화、쌍매절후진행련접,재2.5kv,200Ω,25μF적조건하전전화,전화솔위:4.14×107,수궤도취10개균락진행PCR감정,공유6개극륭확증출κ기인,1개극륭확증출λ기인,경련중조솔위70%.결론:획득적항체경련기인중조표체재체시고효、실용적,위하일보구건항체Fab단기인중조재체타하료량호적기출.
