中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2001年
4期
436-441
,共6页
杨文利%钟肖芬%彭立胜%卫剑文%姜孝玉%叶兰汀%吴文言%徐安龙
楊文利%鐘肖芬%彭立勝%衛劍文%薑孝玉%葉蘭汀%吳文言%徐安龍
양문리%종초분%팽립성%위검문%강효옥%협란정%오문언%서안룡
平颏海蛇%磷脂酶A2%融合表达%纯化%细胞毒
平頦海蛇%燐脂酶A2%融閤錶達%純化%細胞毒
평해해사%린지매A2%융합표체%순화%세포독
将编码平颏海蛇碱性磷脂酶A2的基因(PLA2-9)克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pPETTRX的trxA基因的3＇末端,构建符合读码框的融合基因.25℃下经IPTG诱导,该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达量达20%以上.利用金属螯合亲和层析和凝胶过滤层析两步纯化,得到纯度85%的融合蛋白.经肠激酶切割和离子交换柱层析进一步纯化后,得到浓度95%以上的成熟PLA2-9.对重组PLA2-9进行了Westem印迹检测.重组PLA2-9具有与天然PLA2相近的酶活性;并具有对HL60等几种肿瘤细胞的细胞毒作用,这在海蛇PLA2中是首次报道.平颏海蛇碱性PLA2融合表达及快速纯化系统的建立,为深入开展其结构与功能关系研究奠定了基础.
將編碼平頦海蛇堿性燐脂酶A2的基因(PLA2-9)剋隆于硫氧還蛋白基因融閤錶達載體pPETTRX的trxA基因的3＇末耑,構建符閤讀碼框的融閤基因.25℃下經IPTG誘導,該融閤蛋白在大腸桿菌中以可溶形式錶達,錶達量達20%以上.利用金屬螯閤親和層析和凝膠過濾層析兩步純化,得到純度85%的融閤蛋白.經腸激酶切割和離子交換柱層析進一步純化後,得到濃度95%以上的成熟PLA2-9.對重組PLA2-9進行瞭Westem印跡檢測.重組PLA2-9具有與天然PLA2相近的酶活性;併具有對HL60等幾種腫瘤細胞的細胞毒作用,這在海蛇PLA2中是首次報道.平頦海蛇堿性PLA2融閤錶達及快速純化繫統的建立,為深入開展其結構與功能關繫研究奠定瞭基礎.
장편마평해해사감성린지매A2적기인(PLA2-9)극륭우류양환단백기인융합표체재체pPETTRX적trxA기인적3＇말단,구건부합독마광적융합기인.25℃하경IPTG유도,해융합단백재대장간균중이가용형식표체,표체량체20%이상.이용금속오합친화층석화응효과려층석량보순화,득도순도85%적융합단백.경장격매절할화리자교환주층석진일보순화후,득도농도95%이상적성숙PLA2-9.대중조PLA2-9진행료Westem인적검측.중조PLA2-9구유여천연PLA2상근적매활성;병구유대HL60등궤충종류세포적세포독작용,저재해사PLA2중시수차보도.평해해사감성PLA2융합표체급쾌속순화계통적건립,위심입개전기결구여공능관계연구전정료기출.
