中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
1999年
5期
385-388
,共4页
基因%p53%基因表达%抗体%印迹法%蛋白质
基因%p53%基因錶達%抗體%印跡法%蛋白質
기인%p53%기인표체%항체%인적법%단백질
目的:为探讨肿瘤细胞wt p53蛋白功能失活机制的研究,检测肿瘤患者血清抗p53抗体辅助临床诊断提供人wt p53蛋白.方法:将人wt p53基因cDNA片段插入到大肠杆菌表达载体pQE-30中,得到重组表达质粒pQE30-p53;用pQE30-p53重组质粒转化大肠杆菌M15细胞,转化菌落经PCR扩增和BamHⅠ、Xba Ⅰ酶切证实p53基因插入.IPTG诱导大肠杆菌表达wt p53蛋白,通过Ni-NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE分离.结果:IPTG诱导后的大肠杆菌出现明显的53 kD蛋白带,免疫印迹进一步证实:大肠杆菌可表达高水平的人wt p53蛋白.结论:这种原核细胞表达的人wt p53蛋白具有天然的p53蛋白的抗原性,可用于p53蛋白的体外分析.
目的:為探討腫瘤細胞wt p53蛋白功能失活機製的研究,檢測腫瘤患者血清抗p53抗體輔助臨床診斷提供人wt p53蛋白.方法:將人wt p53基因cDNA片段插入到大腸桿菌錶達載體pQE-30中,得到重組錶達質粒pQE30-p53;用pQE30-p53重組質粒轉化大腸桿菌M15細胞,轉化菌落經PCR擴增和BamHⅠ、Xba Ⅰ酶切證實p53基因插入.IPTG誘導大腸桿菌錶達wt p53蛋白,通過Ni-NTA親和層析柱純化,SDS-PAGE分離.結果:IPTG誘導後的大腸桿菌齣現明顯的53 kD蛋白帶,免疫印跡進一步證實:大腸桿菌可錶達高水平的人wt p53蛋白.結論:這種原覈細胞錶達的人wt p53蛋白具有天然的p53蛋白的抗原性,可用于p53蛋白的體外分析.
목적:위탐토종류세포wt p53단백공능실활궤제적연구,검측종류환자혈청항p53항체보조림상진단제공인wt p53단백.방법:장인wt p53기인cDNA편단삽입도대장간균표체재체pQE-30중,득도중조표체질립pQE30-p53;용pQE30-p53중조질립전화대장간균M15세포,전화균락경PCR확증화BamHⅠ、Xba Ⅰ매절증실p53기인삽입.IPTG유도대장간균표체wt p53단백,통과Ni-NTA친화층석주순화,SDS-PAGE분리.결과:IPTG유도후적대장간균출현명현적53 kD단백대,면역인적진일보증실:대장간균가표체고수평적인wt p53단백.결론:저충원핵세포표체적인wt p53단백구유천연적p53단백적항원성,가용우p53단백적체외분석.
