生物物理学报
生物物理學報
생물물이학보
ACTA BIOPHYSICA SINICA
2003年
1期
13-17
,共5页
齐静%张臻峰%于春风%杨琴%黄志刚%侯亭%黄熙泰
齊靜%張臻峰%于春風%楊琴%黃誌剛%侯亭%黃熙泰
제정%장진봉%우춘풍%양금%황지강%후정%황희태
DNA拓扑结构%螺线管型超螺旋DNA%螺线管型DNA Ⅱ%电子显微镜
DNA拓撲結構%螺線管型超螺鏇DNA%螺線管型DNA Ⅱ%電子顯微鏡
DNA탁복결구%라선관형초라선DNA%라선관형DNA Ⅱ%전자현미경
理论上,游离的超螺旋DNA可以采取两种结构形式:互缠式超螺旋和螺线管型超螺旋.前者早已被透射电子显微镜和原子力显微术的研究所证实,而后者却仍然缺乏足够的证据.使用温和的清亮裂解液法,从DNA拓扑酶野生型大肠杆菌HB101细胞抽提质粒pUC18 DNA.经CsCl-EB平衡密度梯度超离心分离获得超螺旋pUC18 DNA和松弛型pUC18 DNA(DNA Ⅱ).纯化DNA分别用疏水性溶剂系统和亲水性溶剂系统的细胞色素单分子层展开技术制备电子显微镜标本.观察结果显示:在疏水性的甲酰胺-水展开系统中,DNA采取通常的互缠式结构;在含有1.5 mmol/L醋酸铵的水介质中制备的超螺旋DNA标本,DNA采取线圈型结构,测得pUC18 DNA(单体)分子这种结构的外直径约为43.8 nm,内直径约为2 nm.在相同亲水介质中松弛型pUC18DNA采取典型的螺线管型结构,其单体平均外直径约为53.1 nm,内直径约为17.2 nm.表明:在疏水介质中超螺旋DNA趋向于采取互缠式结构,而在亲水介质中DNA则采取螺线管型结构.DNA链之间可能存在非共价相互作用以维持这种结构.螺线管型结构可能是水溶液中的超螺旋DNA分子普遍的存在形式.
理論上,遊離的超螺鏇DNA可以採取兩種結構形式:互纏式超螺鏇和螺線管型超螺鏇.前者早已被透射電子顯微鏡和原子力顯微術的研究所證實,而後者卻仍然缺乏足夠的證據.使用溫和的清亮裂解液法,從DNA拓撲酶野生型大腸桿菌HB101細胞抽提質粒pUC18 DNA.經CsCl-EB平衡密度梯度超離心分離穫得超螺鏇pUC18 DNA和鬆弛型pUC18 DNA(DNA Ⅱ).純化DNA分彆用疏水性溶劑繫統和親水性溶劑繫統的細胞色素單分子層展開技術製備電子顯微鏡標本.觀察結果顯示:在疏水性的甲酰胺-水展開繫統中,DNA採取通常的互纏式結構;在含有1.5 mmol/L醋痠銨的水介質中製備的超螺鏇DNA標本,DNA採取線圈型結構,測得pUC18 DNA(單體)分子這種結構的外直徑約為43.8 nm,內直徑約為2 nm.在相同親水介質中鬆弛型pUC18DNA採取典型的螺線管型結構,其單體平均外直徑約為53.1 nm,內直徑約為17.2 nm.錶明:在疏水介質中超螺鏇DNA趨嚮于採取互纏式結構,而在親水介質中DNA則採取螺線管型結構.DNA鏈之間可能存在非共價相互作用以維持這種結構.螺線管型結構可能是水溶液中的超螺鏇DNA分子普遍的存在形式.
이론상,유리적초라선DNA가이채취량충결구형식:호전식초라선화라선관형초라선.전자조이피투사전자현미경화원자력현미술적연구소증실,이후자각잉연결핍족구적증거.사용온화적청량렬해액법,종DNA탁복매야생형대장간균HB101세포추제질립pUC18 DNA.경CsCl-EB평형밀도제도초리심분리획득초라선pUC18 DNA화송이형pUC18 DNA(DNA Ⅱ).순화DNA분별용소수성용제계통화친수성용제계통적세포색소단분자층전개기술제비전자현미경표본.관찰결과현시:재소수성적갑선알-수전개계통중,DNA채취통상적호전식결구;재함유1.5 mmol/L작산안적수개질중제비적초라선DNA표본,DNA채취선권형결구,측득pUC18 DNA(단체)분자저충결구적외직경약위43.8 nm,내직경약위2 nm.재상동친수개질중송이형pUC18DNA채취전형적라선관형결구,기단체평균외직경약위53.1 nm,내직경약위17.2 nm.표명:재소수개질중초라선DNA추향우채취호전식결구,이재친수개질중DNA칙채취라선관형결구.DNA련지간가능존재비공개상호작용이유지저충결구.라선관형결구가능시수용액중적초라선DNA분자보편적존재형식.
