CAJ | 학술논문

目的研制基因工程胰高血糖素.方法利用pCYB1表达载体,亚克隆胰高血糖素基因后转化于BL21(DE3)菌种,并对阳性克隆的质粒进行DNA测序.检测不同条件下,IPTG诱导胰高血糖素-intein-几丁质结合结构域(CBD)组成的融合蛋白表达量,确定工程菌表达最适条件.利用几丁质结合柱进行亲和层析,在DTT作用下由intein在柱上进行自我切割,纯化胰高血糖素.SDS-PAGE检测融合蛋白表达量,SDS-PAGE在Tris-Tricine缓冲系统中电泳检测纯度,Lowry法检测蛋白质含量,Western blot检测免疫原性,升血糖实验检测活性并进行N-末端测序.结果 DNA测序显示表达产物基因序列正确,纯化胰高血糖素具有免疫原性和生物学活性,N-端15个氨基酸与天然产品相同,电泳呈单一谱带,产率为1.25mg/L.结论获得分泌胰高血糖素基因工程菌,适于快速大规模生产.
목적연제기인공정이고혈당소.방법이용pCYB1표체재체,아극륭이고혈당소기인후전화우BL21(DE3)균충,병대양성극륭적질립진행DNA측서.검측불동조건하,IPTG유도이고혈당소-intein-궤정질결합결구역(CBD)조성적융합단백표체량,학정공정균표체최괄조건.이용궤정질결합주진행친화층석,재DTT작용하유intein재주상진행자아절할,순화이고혈당소.SDS-PAGE검측융합단백표체량,SDS-PAGE재Tris-Tricine완충계통중전영검측순도,Lowry법검측단백질함량,Western blot검측면역원성,승혈당실험검측활성병진행N-말단측서.결과 DNA측서현시표체산물기인서렬정학,순화이고혈당소구유면역원성화생물학활성,N-단15개안기산여천연산품상동,전영정단일보대,산솔위1.25mg/L.결론획득분비이고혈당소기인공정균,괄우쾌속대규모생산.