微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2002年
4期
400-405
,共6页
杨文利%叶兰汀%邹兰%汪枫%徐安龙
楊文利%葉蘭汀%鄒蘭%汪楓%徐安龍
양문리%협란정%추란%왕풍%서안룡
平颏海蛇磷脂酶A2%融合表达%亲和层析
平頦海蛇燐脂酶A2%融閤錶達%親和層析
평해해사린지매A2%융합표체%친화층석
将编码平颏海蛇磷脂酶A2的基因(PLA2-9)分别克隆于硫氧环蛋白基因融合表达载体pThioHisC和pTRX的HP-trxA和trxA基因的3′末端,构建符合读码框的融合表达载体pThioHisC-PLA2和pTRX-PLA2.25℃下经IPTG诱导,PLA2融合蛋白在两种原核系统中均能获得较高表达,但PLA2在pTRX系统下的表达量和蛋白溶解性优于pThioHisC系统.将两种系统下的表达产物进行金属螯合亲和层析纯化,Trx-PLA2融合蛋白的纯度可达85%以上,而HP-Trx-PLA2不表现出对介质的亲和性,难以得到纯化.由此,将pTRX-PLA2载体系统确立为进一步大量表达和纯化的载体系统.
將編碼平頦海蛇燐脂酶A2的基因(PLA2-9)分彆剋隆于硫氧環蛋白基因融閤錶達載體pThioHisC和pTRX的HP-trxA和trxA基因的3′末耑,構建符閤讀碼框的融閤錶達載體pThioHisC-PLA2和pTRX-PLA2.25℃下經IPTG誘導,PLA2融閤蛋白在兩種原覈繫統中均能穫得較高錶達,但PLA2在pTRX繫統下的錶達量和蛋白溶解性優于pThioHisC繫統.將兩種繫統下的錶達產物進行金屬螯閤親和層析純化,Trx-PLA2融閤蛋白的純度可達85%以上,而HP-Trx-PLA2不錶現齣對介質的親和性,難以得到純化.由此,將pTRX-PLA2載體繫統確立為進一步大量錶達和純化的載體繫統.
장편마평해해사린지매A2적기인(PLA2-9)분별극륭우류양배단백기인융합표체재체pThioHisC화pTRX적HP-trxA화trxA기인적3′말단,구건부합독마광적융합표체재체pThioHisC-PLA2화pTRX-PLA2.25℃하경IPTG유도,PLA2융합단백재량충원핵계통중균능획득교고표체,단PLA2재pTRX계통하적표체량화단백용해성우우pThioHisC계통.장량충계통하적표체산물진행금속오합친화층석순화,Trx-PLA2융합단백적순도가체85%이상,이HP-Trx-PLA2불표현출대개질적친화성,난이득도순화.유차,장pTRX-PLA2재체계통학립위진일보대량표체화순화적재체계통.
