CAJ | 학술논문

背景与目的:近年研究表明,EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)潜伏性膜蛋白基因(latent membrane protein gene,LMP)在鼻咽癌的发生和发展中起着重要作用.本研究着重构建体外基因反义转录系统,研究反义 LMPmRNA对 EBV转化细胞基因表达的抑制作用.方法:构建和制备反义核酸单链有效的体外转录系统 ; 设计和建立反义原位示踪技术,以探测正、反义链配对互补聚合体的定位 ; 通过对 EBV转化细胞系(C1936和 B95-8)的反义控制,测定细胞生长的抑制率,观测转化细胞凝集表型 ; 通过对 EBV-LMP基因表达的检测和 MTT吸收活性的测试,测定转化细胞在基因转录下调之后的生存状态.结果:构建成制备反义 RNA的 SP6/T7双向启动子的体外基因转录系统.反义工程产物 AsLMPmRNA通过胞饮作用掺入转化细胞后,经原位示踪显示,正 -反义链聚合物的封闭位点主要在 mRNA前体剪接加工成熟的后阶段 ; 转化细胞增殖能力下降(生长抑制率 85.5%),细胞转化的凝集表型受抑制,MTT吸收值显著降低,显示被反义控制的 C1936和 B95-8细胞系的生长受到严重的抑制.应用反义原位示踪系统(antisense tracing system in situ,ATSIS)显示,AsLMPmRNA有特定靶点和抑制效应.结论:本实验所建成的体外反义转录系统所制备的 RNA反义工程产物(AsLMPmRNA),有特定的选择靶点作用和高效的生物活性(特定基因 LMP表达负调节).这为反义控制转化细胞和开发反义基因工程药物提供了重要依据.
배경여목적:근년연구표명,EB병독(Epstein-Barr virus,EBV)잠복성막단백기인(latent membrane protein gene,LMP)재비인암적발생화발전중기착중요작용.본연구착중구건체외기인반의전록계통,연구반의 LMPmRNA대 EBV전화세포기인표체적억제작용.방법:구건화제비반의핵산단련유효적체외전록계통 ; 설계화건립반의원위시종기술,이탐측정、반의련배대호보취합체적정위 ; 통과대 EBV전화세포계(C1936화 B95-8)적반의공제,측정세포생장적억제솔,관측전화세포응집표형 ; 통과대 EBV-LMP기인표체적검측화 MTT흡수활성적측시,측정전화세포재기인전록하조지후적생존상태.결과:구건성제비반의 RNA적 SP6/T7쌍향계동자적체외기인전록계통.반의공정산물 AsLMPmRNA통과포음작용참입전화세포후,경원위시종현시,정 -반의련취합물적봉폐위점주요재 mRNA전체전접가공성숙적후계단 ; 전화세포증식능력하강(생장억제솔 85.5%),세포전화적응집표형수억제,MTT흡수치현저강저,현시피반의공제적 C1936화 B95-8세포계적생장수도엄중적억제.응용반의원위시종계통(antisense tracing system in situ,ATSIS)현시,AsLMPmRNA유특정파점화억제효응.결론:본실험소건성적체외반의전록계통소제비적 RNA반의공정산물(AsLMPmRNA),유특정적선택파점작용화고효적생물활성(특정기인 LMP표체부조절).저위반의공제전화세포화개발반의기인공정약물제공료중요의거.