中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2001年
8期
808
,共1页
何泼%戴保民%乔中东%游自立%方之茂
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目的:通过不同型钩体DNA序列分析筛选钩体基因疫苗的候选株,并从基因水平解释钩体血清型的特异性.方法:(1)酚、氯仿抽提法提取017株与56610株钩体基因组DNA.(2)分别以017株与56610株钩体基因组DNA为模板,PCR法扩增内鞭毛蛋白(flaB)基因.(3)T/A快速克隆法将两个flaB基因的PCR产物连接与Teasy-vector载体.(4)α-互补、PCR法初步筛选重组质粒.(5)碱裂解法小量提取质粒、酚切分析进一步鉴定重组质粒,确定外源基因插入方向.(6)双脱氧终止法对重组质粒的克隆化flaB基因进行测序.(7)应用软件对所测序列进行酶切位分析及编码蛋白的预测.(8)与已发表的钩体内鞭毛基因进行比较.结果:经鉴定获得了两个重组质粒pDHTF017与pDHTF610.pDHTF017中flaB基因为反向插入,pDHTF610中的flaB基因为正向插入.两个重组外源flaB基因长度均为852 bp,编码蛋白含283个氨基酸,预测分子量为31.5 kD左右.两个基因的限制性内切酶位点相似,含多个常见酶切位点.几个血清型钩体的flaB基因比较发现型间同源性很高(90%-99%),变异通常发生在固定位点,各型选择不同的固定位点.结论:(1)重组质粒pDHTF017与pDHTF610中的外源基因均为钩体的一种flaB基因; (2)flaB基因保守性强,可作为基因疫苗的靶基因;(3)七日热型钩体56610株的flaB基因有望成为核心抗原基因,可进行钩体疫苗的研究开发.
目的:通過不同型鉤體DNA序列分析篩選鉤體基因疫苗的候選株,併從基因水平解釋鉤體血清型的特異性.方法:(1)酚、氯倣抽提法提取017株與56610株鉤體基因組DNA.(2)分彆以017株與56610株鉤體基因組DNA為模闆,PCR法擴增內鞭毛蛋白(flaB)基因.(3)T/A快速剋隆法將兩箇flaB基因的PCR產物連接與Teasy-vector載體.(4)α-互補、PCR法初步篩選重組質粒.(5)堿裂解法小量提取質粒、酚切分析進一步鑒定重組質粒,確定外源基因插入方嚮.(6)雙脫氧終止法對重組質粒的剋隆化flaB基因進行測序.(7)應用軟件對所測序列進行酶切位分析及編碼蛋白的預測.(8)與已髮錶的鉤體內鞭毛基因進行比較.結果:經鑒定穫得瞭兩箇重組質粒pDHTF017與pDHTF610.pDHTF017中flaB基因為反嚮插入,pDHTF610中的flaB基因為正嚮插入.兩箇重組外源flaB基因長度均為852 bp,編碼蛋白含283箇氨基痠,預測分子量為31.5 kD左右.兩箇基因的限製性內切酶位點相似,含多箇常見酶切位點.幾箇血清型鉤體的flaB基因比較髮現型間同源性很高(90%-99%),變異通常髮生在固定位點,各型選擇不同的固定位點.結論:(1)重組質粒pDHTF017與pDHTF610中的外源基因均為鉤體的一種flaB基因; (2)flaB基因保守性彊,可作為基因疫苗的靶基因;(3)七日熱型鉤體56610株的flaB基因有望成為覈心抗原基因,可進行鉤體疫苗的研究開髮.
목적:통과불동형구체DNA서렬분석사선구체기인역묘적후선주,병종기인수평해석구체혈청형적특이성.방법:(1)분、록방추제법제취017주여56610주구체기인조DNA.(2)분별이017주여56610주구체기인조DNA위모판,PCR법확증내편모단백(flaB)기인.(3)T/A쾌속극륭법장량개flaB기인적PCR산물련접여Teasy-vector재체.(4)α-호보、PCR법초보사선중조질립.(5)감렬해법소량제취질립、분절분석진일보감정중조질립,학정외원기인삽입방향.(6)쌍탈양종지법대중조질립적극륭화flaB기인진행측서.(7)응용연건대소측서렬진행매절위분석급편마단백적예측.(8)여이발표적구체내편모기인진행비교.결과:경감정획득료량개중조질립pDHTF017여pDHTF610.pDHTF017중flaB기인위반향삽입,pDHTF610중적flaB기인위정향삽입.량개중조외원flaB기인장도균위852 bp,편마단백함283개안기산,예측분자량위31.5 kD좌우.량개기인적한제성내절매위점상사,함다개상견매절위점.궤개혈청형구체적flaB기인비교발현형간동원성흔고(90%-99%),변이통상발생재고정위점,각형선택불동적고정위점.결론:(1)중조질립pDHTF017여pDHTF610중적외원기인균위구체적일충flaB기인; (2)flaB기인보수성강,가작위기인역묘적파기인;(3)칠일열형구체56610주적flaB기인유망성위핵심항원기인,가진행구체역묘적연구개발.
