第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2004年
7期
631-634
,共4页
李文刚%邵沂%陈红%王艳斌%于敏%徐小元
李文剛%邵沂%陳紅%王豔斌%于敏%徐小元
리문강%소기%진홍%왕염빈%우민%서소원
趋化因子受体%腺病毒载体%双靶区反义RNA
趨化因子受體%腺病毒載體%雙靶區反義RNA
추화인자수체%선병독재체%쌍파구반의RNA
目的:构建趋化因子受体CCR5,CXCR4双靶区反义RNA重组载体并获取重组腺病毒以用于抗HIV-1基因治疗的研究.方法:用RT-PCR法从健康人外周血单个核细胞中分别扩增出趋化因子受体CCR5,CXCR45′端翻译起始区653bp和636bp的cDNA片段,将其反向插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack-CMV中,再与包装质粒pAdEasy-1共转染BJ5183细菌同源重组,卡那抗性培养基筛选阳性克隆;同源重组的载体用脂质体转染剂转染293细胞包装、扩增,荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)以及PCR法鉴定、氯化铯密度梯度离心法纯化重组腺病毒.结果:成功构建了CCR5,CXCR4双靶区反义RNA重组腺病毒载体,并于293细胞中包装、扩增得到高滴度的重组腺病毒,其滴度为:7.2×1012PFU/mL.结论:CCR5,CXCR4双靶区反义RNA重组腺病毒的构建为研究双靶位辅助受体反义RNA抗HIV-1的作用打下基础.
目的:構建趨化因子受體CCR5,CXCR4雙靶區反義RNA重組載體併穫取重組腺病毒以用于抗HIV-1基因治療的研究.方法:用RT-PCR法從健康人外週血單箇覈細胞中分彆擴增齣趨化因子受體CCR5,CXCR45′耑翻譯起始區653bp和636bp的cDNA片段,將其反嚮插入腺病毒穿梭載體質粒pAdTrack-CMV中,再與包裝質粒pAdEasy-1共轉染BJ5183細菌同源重組,卡那抗性培養基篩選暘性剋隆;同源重組的載體用脂質體轉染劑轉染293細胞包裝、擴增,熒光顯微鏡下觀察細胞中綠色熒光蛋白(GFP)以及PCR法鑒定、氯化銫密度梯度離心法純化重組腺病毒.結果:成功構建瞭CCR5,CXCR4雙靶區反義RNA重組腺病毒載體,併于293細胞中包裝、擴增得到高滴度的重組腺病毒,其滴度為:7.2×1012PFU/mL.結論:CCR5,CXCR4雙靶區反義RNA重組腺病毒的構建為研究雙靶位輔助受體反義RNA抗HIV-1的作用打下基礎.
목적:구건추화인자수체CCR5,CXCR4쌍파구반의RNA중조재체병획취중조선병독이용우항HIV-1기인치료적연구.방법:용RT-PCR법종건강인외주혈단개핵세포중분별확증출추화인자수체CCR5,CXCR45′단번역기시구653bp화636bp적cDNA편단,장기반향삽입선병독천사재체질립pAdTrack-CMV중,재여포장질립pAdEasy-1공전염BJ5183세균동원중조,잡나항성배양기사선양성극륭;동원중조적재체용지질체전염제전염293세포포장、확증,형광현미경하관찰세포중록색형광단백(GFP)이급PCR법감정、록화색밀도제도리심법순화중조선병독.결과:성공구건료CCR5,CXCR4쌍파구반의RNA중조선병독재체,병우293세포중포장、확증득도고적도적중조선병독,기적도위:7.2×1012PFU/mL.결론:CCR5,CXCR4쌍파구반의RNA중조선병독적구건위연구쌍파위보조수체반의RNA항HIV-1적작용타하기출.
