中国科学C辑
中國科學C輯
중국과학C집
SCIENCE IN CHINA (SERIES C)
2007年
1期
65-72
,共8页
张立树%金宁一%宋英今%王宏%马鹤雯%李子健%江文正
張立樹%金寧一%宋英今%王宏%馬鶴雯%李子健%江文正
장립수%금저일%송영금%왕굉%마학문%리자건%강문정
I型人免疫缺陷病毒%多表位%重组%鸡痘病毒%免疫
I型人免疫缺陷病毒%多錶位%重組%鷄痘病毒%免疫
I형인면역결함병독%다표위%중조%계두병독%면역
将HIV-1 p24基因插入至人工设计的复合多表位基因MEG中, 获得嵌合基因MEGp24; 将MEGp24插入到转移载体pUTA2复合启动子ATI-P7.5×20下游, 构建出鸡痘病毒重组转移质粒; 经转染和BrdU加压筛选, 以基因组PCR和Western blot法筛选出重组病毒; 将重组病毒大量制备并纯化后, 分别于0, 14, 42天肌肉注射免疫BALB/c小鼠; 第3次免疫后一周, 采集小鼠全血与脾脏, 分离血清并无菌制备脾淋巴细胞, ELISA法检测小鼠血清HIV-1抗体、脾细胞培养上清中Th1类细胞因子IFN-α和IL-2的含量, 流式细胞仪测定CD4+, CD8+ T淋巴细胞亚类数量, 乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾特异性CTL杀伤活性. 结果表明, 重组病毒刺激小鼠产生HIV-1特异性抗体, 出现T细胞亚类数量增加, 产生针对HIV-1 H-2d限制性CTL表位的特异性靶细胞杀伤作用, 同时免疫小鼠脾细胞在HIV-1抗原肽的刺激下分泌Th1类细胞因子的水平大幅增加. 研究提示多表位嵌合基因重组FPV疫苗具有良好的免疫原性, 可诱导小鼠产生HIV-1特异性细胞和体液免疫应答.
將HIV-1 p24基因插入至人工設計的複閤多錶位基因MEG中, 穫得嵌閤基因MEGp24; 將MEGp24插入到轉移載體pUTA2複閤啟動子ATI-P7.5×20下遊, 構建齣鷄痘病毒重組轉移質粒; 經轉染和BrdU加壓篩選, 以基因組PCR和Western blot法篩選齣重組病毒; 將重組病毒大量製備併純化後, 分彆于0, 14, 42天肌肉註射免疫BALB/c小鼠; 第3次免疫後一週, 採集小鼠全血與脾髒, 分離血清併無菌製備脾淋巴細胞, ELISA法檢測小鼠血清HIV-1抗體、脾細胞培養上清中Th1類細胞因子IFN-α和IL-2的含量, 流式細胞儀測定CD4+, CD8+ T淋巴細胞亞類數量, 乳痠脫氫酶(LDH)釋放法檢測脾特異性CTL殺傷活性. 結果錶明, 重組病毒刺激小鼠產生HIV-1特異性抗體, 齣現T細胞亞類數量增加, 產生針對HIV-1 H-2d限製性CTL錶位的特異性靶細胞殺傷作用, 同時免疫小鼠脾細胞在HIV-1抗原肽的刺激下分泌Th1類細胞因子的水平大幅增加. 研究提示多錶位嵌閤基因重組FPV疫苗具有良好的免疫原性, 可誘導小鼠產生HIV-1特異性細胞和體液免疫應答.
장HIV-1 p24기인삽입지인공설계적복합다표위기인MEG중, 획득감합기인MEGp24; 장MEGp24삽입도전이재체pUTA2복합계동자ATI-P7.5×20하유, 구건출계두병독중조전이질립; 경전염화BrdU가압사선, 이기인조PCR화Western blot법사선출중조병독; 장중조병독대량제비병순화후, 분별우0, 14, 42천기육주사면역BALB/c소서; 제3차면역후일주, 채집소서전혈여비장, 분리혈청병무균제비비림파세포, ELISA법검측소서혈청HIV-1항체、비세포배양상청중Th1류세포인자IFN-α화IL-2적함량, 류식세포의측정CD4+, CD8+ T림파세포아류수량, 유산탈경매(LDH)석방법검측비특이성CTL살상활성. 결과표명, 중조병독자격소서산생HIV-1특이성항체, 출현T세포아류수량증가, 산생침대HIV-1 H-2d한제성CTL표위적특이성파세포살상작용, 동시면역소서비세포재HIV-1항원태적자격하분비Th1류세포인자적수평대폭증가. 연구제시다표위감합기인중조FPV역묘구유량호적면역원성, 가유도소서산생HIV-1특이성세포화체액면역응답.
