华中医学杂志
華中醫學雜誌
화중의학잡지
CENTRAL CHINA MEDICAL JOURNAL
2008年
4期
297-300
,共4页
梅奕%李佳楠%陈雪玲%吴雄文%梁智辉
梅奕%李佳楠%陳雪玲%吳雄文%樑智輝
매혁%리가남%진설령%오웅문%량지휘
可溶性Fas%原核表达%抑制%凋亡
可溶性Fas%原覈錶達%抑製%凋亡
가용성Fas%원핵표체%억제%조망
目的 观察原核表达、制备小鼠可溶性Fas用于抑制活化诱导的脾细胞凋亡的效果.方法 通过RT-PCR从小鼠胸腺中扩增可溶性Fas基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建pET-sFas重组质粒,转化大肠杆菌BL21,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得高表达的可溶性Fas.经镍柱亲和层析纯化后用于抑制刀豆素A(ConA)刺激下的脾细胞活化诱导凋亡.结果 基因测序、Western-blot鉴定证实为可溶性Fas的原核表达蛋白,该蛋白能抑制小鼠脾细胞在ConA刺激下发生的凋亡[对照组凋亡率(70.3±4.9)%和实验组凋亡率(8.5±0.4.35)%有极显著差异(P<0.01)].结论 原核表达的可溶性Fas能够抑制小鼠脾细胞在ConA刺激下发生凋亡,为进一步抑制活化的T淋巴细胞凋亡及体外大量制备抗原特异性T细胞提供思路.
目的 觀察原覈錶達、製備小鼠可溶性Fas用于抑製活化誘導的脾細胞凋亡的效果.方法 通過RT-PCR從小鼠胸腺中擴增可溶性Fas基因,剋隆至原覈錶達載體pET-28a(+),構建pET-sFas重組質粒,轉化大腸桿菌BL21,經異丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導後穫得高錶達的可溶性Fas.經鎳柱親和層析純化後用于抑製刀豆素A(ConA)刺激下的脾細胞活化誘導凋亡.結果 基因測序、Western-blot鑒定證實為可溶性Fas的原覈錶達蛋白,該蛋白能抑製小鼠脾細胞在ConA刺激下髮生的凋亡[對照組凋亡率(70.3±4.9)%和實驗組凋亡率(8.5±0.4.35)%有極顯著差異(P<0.01)].結論 原覈錶達的可溶性Fas能夠抑製小鼠脾細胞在ConA刺激下髮生凋亡,為進一步抑製活化的T淋巴細胞凋亡及體外大量製備抗原特異性T細胞提供思路.
목적 관찰원핵표체、제비소서가용성Fas용우억제활화유도적비세포조망적효과.방법 통과RT-PCR종소서흉선중확증가용성Fas기인,극륭지원핵표체재체pET-28a(+),구건pET-sFas중조질립,전화대장간균BL21,경이병기β-D-류대반유당감(IPTG)유도후획득고표체적가용성Fas.경얼주친화층석순화후용우억제도두소A(ConA)자격하적비세포활화유도조망.결과 기인측서、Western-blot감정증실위가용성Fas적원핵표체단백,해단백능억제소서비세포재ConA자격하발생적조망[대조조조망솔(70.3±4.9)%화실험조조망솔(8.5±0.4.35)%유겁현저차이(P<0.01)].결론 원핵표체적가용성Fas능구억제소서비세포재ConA자격하발생조망,위진일보억제활화적T림파세포조망급체외대량제비항원특이성T세포제공사로.
