CAJ | 학술논문

通过RT-PCR从浙双758油菜(Brassica napus)种子的总RNA中扩增出黑芥子酶(EC3.2.1.147)MYR J基因,并克隆测序,测序结果在GenBank中的登陆号为EF583560,其翻译的氨基酸序列与黑芥子酶(GenBank中的登陆号为Q00326)仅有一个氨基酸不同,同源性达到99%.克隆载体经Sal I酶解后将MYRI基因片段插入载体pGEX-4T-1中构建成原核表达载体pGEX-4T-1-MYR1,并转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中.其重组菌株经IPTG诱导表达,在90 kD处有表达量很高的1条带.用0.02 mmol/L IPTG 20℃诱导2 h,得到可溶的GST-MYR1融合蛋白,用10 mg/mL芥子苷作底物,经过检测其比活力为0.003 1 U/mg.
통과RT-PCR종절쌍758유채(Brassica napus)충자적총RNA중확증출흑개자매(EC3.2.1.147)MYR J기인,병극륭측서,측서결과재GenBank중적등륙호위EF583560,기번역적안기산서렬여흑개자매(GenBank중적등륙호위Q00326)부유일개안기산불동,동원성체도99%.극륭재체경Sal I매해후장MYRI기인편단삽입재체pGEX-4T-1중구건성원핵표체재체pGEX-4T-1-MYR1,병전입대장간균(Escherichia coli)BL21(DE3)중.기중조균주경IPTG유도표체,재90 kD처유표체량흔고적1조대.용0.02 mmol/L IPTG 20℃유도2 h,득도가용적GST-MYR1융합단백,용10 mg/mL개자감작저물,경과검측기비활력위0.003 1 U/mg.