CAJ | 학술논문

利用高保真PCR技术获得唐鱼(Tanichthys albonubes)长为1.3 kb的卢肌动蛋白(β-actin)的端启动调控序列(TA,1.3 kb).在此基础上采用基因组步移技术(Genome walker)获得5'侧翼上游序列1.7 kb,再根据所获的近端启动子序列和上游序列设计引物,扩增获得全长为3.0 kb的唐鱼β-actin基因远端启动调控序列(TLA,3.0 kb).此1.3 kb和3.0 kb启动调控序列均包含3个转录活性元件:CAAT Box(-89～-85),CArG Box(-59～-49),TATA Box(-26～-20).利用启动子分析软件TRANSFAC 6.0分析,结果显示启动调控序列(-105～1261)国含有E-Box、NF-Y、Spl等多个重要转录因子结合位点,在远端启动调控序列(-1719～1261)中还含有更多的重要转录因子结合位点.将这两个序列分别定向克隆到红色荧光蛋白(Red fluorescent protein,RFP)表达载体中,构建重组表达载体pTLA-DsRed和pTA-DsRed,并分别注射到唐鱼受精卵中.结果显示转pTLA-DsRed基因唐鱼的阳性率较转pTA-DsRed的高,且所发出的红色荧光的强度也比后者的强.采用RT-PCR检测孵化后第15天的转基因唐鱼中RFP的mRNA,结果显示转pTLA-DsRed基因唐鱼中RFPmRNA的表达量比转pTA-DsRed基因唐鱼高35.7%.结果表明两种长度的启动调控序列均能有效驱使外源基因在唐鱼体内表达,且长度为3.0 kb的启动子序列具有更强的驱动活性.
이용고보진PCR기술획득당어(Tanichthys albonubes)장위1.3 kb적로기동단백(β-actin)적단계동조공서렬(TA,1.3 kb).재차기출상채용기인조보이기술(Genome walker)획득5'측익상유서렬1.7 kb,재근거소획적근단계동자서렬화상유서렬설계인물,확증획득전장위3.0 kb적당어β-actin기인원단계동조공서렬(TLA,3.0 kb).차1.3 kb화3.0 kb계동조공서렬균포함3개전록활성원건:CAAT Box(-89～-85),CArG Box(-59～-49),TATA Box(-26～-20).이용계동자분석연건TRANSFAC 6.0분석,결과현시계동조공서렬(-105～1261)국함유E-Box、NF-Y、Spl등다개중요전록인자결합위점,재원단계동조공서렬(-1719～1261)중환함유경다적중요전록인자결합위점.장저량개서렬분별정향극륭도홍색형광단백(Red fluorescent protein,RFP)표체재체중,구건중조표체재체pTLA-DsRed화pTA-DsRed,병분별주사도당어수정란중.결과현시전pTLA-DsRed기인당어적양성솔교전pTA-DsRed적고,차소발출적홍색형광적강도야비후자적강.채용RT-PCR검측부화후제15천적전기인당어중RFP적mRNA,결과현시전pTLA-DsRed기인당어중RFPmRNA적표체량비전pTA-DsRed기인당어고35.7%.결과표명량충장도적계동조공서렬균능유효구사외원기인재당어체내표체,차장도위3.0 kb적계동자서렬구유경강적구동활성.