中国水产科学
中國水產科學
중국수산과학
Journal of Fishery Sciences of China
2009年
4期
564-571
,共8页
任伟成%王崇明%孙世春%蔡玉勇%李赟%于佐安
任偉成%王崇明%孫世春%蔡玉勇%李赟%于佐安
임위성%왕숭명%손세춘%채옥용%리빈%우좌안
栉孔扇贝%AVNV%AVND%荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PcR)%TaqMan探针
櫛孔扇貝%AVNV%AVND%熒光定量聚閤酶鏈式反應(FQ-PcR)%TaqMan探針
즐공선패%AVNV%AVND%형광정량취합매련식반응(FQ-PcR)%TaqMan탐침
根据栉孔扇贝(Chlamys farreri)急性病毒性坏死病毒(Acute viral necmbiotic virus,AVNV)的基因序列,选择保守区段,应用Beacon Designer 7.0软件设计了一对能特异性扩增90 bp片段的引物和Taq Man探针,建立并完善了AVNV荧光定量聚合酶链式反应(Huorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)诊断方法.该方法在108～102病毒拷贝范围内有较好的线性关系,AVNV拷贝数(X)和循环数(G1)的相关关系为:IgX=-0.29C1+13.28(相关系数R2=0.998);检测AVNV的灵敏度为102拷贝;特异性实验表明只对AVNV基因组呈阳性反应.应用FQ-PCR对76份采自夏季发病期前后的栉孔扇贝样品进行检测,结果发现68份样品检测结果为阳性,阳性检出率为89.47%,高于普通PCR的阳性检出率(80.26%).研究结果表明,该方法快速、灵敏,特异、重复性良好且能实现AVNV的定量检测,对AVNV的快速诊断和分子流行病学的调查以及AVNV疫情监测具有重要意义.
根據櫛孔扇貝(Chlamys farreri)急性病毒性壞死病毒(Acute viral necmbiotic virus,AVNV)的基因序列,選擇保守區段,應用Beacon Designer 7.0軟件設計瞭一對能特異性擴增90 bp片段的引物和Taq Man探針,建立併完善瞭AVNV熒光定量聚閤酶鏈式反應(Huorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)診斷方法.該方法在108～102病毒拷貝範圍內有較好的線性關繫,AVNV拷貝數(X)和循環數(G1)的相關關繫為:IgX=-0.29C1+13.28(相關繫數R2=0.998);檢測AVNV的靈敏度為102拷貝;特異性實驗錶明隻對AVNV基因組呈暘性反應.應用FQ-PCR對76份採自夏季髮病期前後的櫛孔扇貝樣品進行檢測,結果髮現68份樣品檢測結果為暘性,暘性檢齣率為89.47%,高于普通PCR的暘性檢齣率(80.26%).研究結果錶明,該方法快速、靈敏,特異、重複性良好且能實現AVNV的定量檢測,對AVNV的快速診斷和分子流行病學的調查以及AVNV疫情鑑測具有重要意義.
근거즐공선패(Chlamys farreri)급성병독성배사병독(Acute viral necmbiotic virus,AVNV)적기인서렬,선택보수구단,응용Beacon Designer 7.0연건설계료일대능특이성확증90 bp편단적인물화Taq Man탐침,건립병완선료AVNV형광정량취합매련식반응(Huorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)진단방법.해방법재108～102병독고패범위내유교호적선성관계,AVNV고패수(X)화순배수(G1)적상관관계위:IgX=-0.29C1+13.28(상관계수R2=0.998);검측AVNV적령민도위102고패;특이성실험표명지대AVNV기인조정양성반응.응용FQ-PCR대76빈채자하계발병기전후적즐공선패양품진행검측,결과발현68빈양품검측결과위양성,양성검출솔위89.47%,고우보통PCR적양성검출솔(80.26%).연구결과표명,해방법쾌속、령민,특이、중복성량호차능실현AVNV적정량검측,대AVNV적쾌속진단화분자류행병학적조사이급AVNV역정감측구유중요의의.
