高等学校化学学报
高等學校化學學報
고등학교화학학보
CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES
2009年
6期
1121-1127
,共7页
渠凌丽%黎源倩%郑波%何成艳%何玲%李永新
渠凌麗%黎源倩%鄭波%何成豔%何玲%李永新
거릉려%려원천%정파%하성염%하령%리영신
多响应曲面优化%毛细管电泳%激光诱导荧光检测%食源性致病菌%多重PCR
多響應麯麵優化%毛細管電泳%激光誘導熒光檢測%食源性緻病菌%多重PCR
다향응곡면우화%모세관전영%격광유도형광검측%식원성치병균%다중PCR
建立了食品中常见致病菌:沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157:H7的rfb O157基因、志贺菌的自ipaH基因及副溶血性弧菌Vpara(16S-23S rDNA IGS)基因的多重PCR产物-毛细管电泳快速检测方法.根据沙门菌、大肠杆菌O157:H7、志贺菌及副溶血性弧菌的特异性基因保守序列设计出多重PCR引物,优化PCR扩增反应体系.采用多响应曲面法优化毛细管电泳的分离条件,以含有DNA荧光染料SYBR Green I的1.0%甲基纤维素为筛分介质,通过毛细管电泳-激光诱导荧光同时检测4种常见致病菌的PCR扩增产物.在优化的多重PCR反应体系和毛细管筛分电泳条件下,此方法可以同时检测出沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157:H7的rfb O157基因、志贺菌的ipa H基因及副溶血性弧菌Vara(16S-23S rDNA IGS)基因的多重PCR扩增产物,25 min内即可完成检测.迁移时间的日内相对标准偏差为0.92%～1.58%.通过多响应曲面的优化,有效改善了毛细管电泳对DNA分子的分离能力.
建立瞭食品中常見緻病菌:沙門菌的invA基因、大腸桿菌O157:H7的rfb O157基因、誌賀菌的自ipaH基因及副溶血性弧菌Vpara(16S-23S rDNA IGS)基因的多重PCR產物-毛細管電泳快速檢測方法.根據沙門菌、大腸桿菌O157:H7、誌賀菌及副溶血性弧菌的特異性基因保守序列設計齣多重PCR引物,優化PCR擴增反應體繫.採用多響應麯麵法優化毛細管電泳的分離條件,以含有DNA熒光染料SYBR Green I的1.0%甲基纖維素為篩分介質,通過毛細管電泳-激光誘導熒光同時檢測4種常見緻病菌的PCR擴增產物.在優化的多重PCR反應體繫和毛細管篩分電泳條件下,此方法可以同時檢測齣沙門菌的invA基因、大腸桿菌O157:H7的rfb O157基因、誌賀菌的ipa H基因及副溶血性弧菌Vara(16S-23S rDNA IGS)基因的多重PCR擴增產物,25 min內即可完成檢測.遷移時間的日內相對標準偏差為0.92%～1.58%.通過多響應麯麵的優化,有效改善瞭毛細管電泳對DNA分子的分離能力.
건립료식품중상견치병균:사문균적invA기인、대장간균O157:H7적rfb O157기인、지하균적자ipaH기인급부용혈성호균Vpara(16S-23S rDNA IGS)기인적다중PCR산물-모세관전영쾌속검측방법.근거사문균、대장간균O157:H7、지하균급부용혈성호균적특이성기인보수서렬설계출다중PCR인물,우화PCR확증반응체계.채용다향응곡면법우화모세관전영적분리조건,이함유DNA형광염료SYBR Green I적1.0%갑기섬유소위사분개질,통과모세관전영-격광유도형광동시검측4충상견치병균적PCR확증산물.재우화적다중PCR반응체계화모세관사분전영조건하,차방법가이동시검측출사문균적invA기인、대장간균O157:H7적rfb O157기인、지하균적ipa H기인급부용혈성호균Vara(16S-23S rDNA IGS)기인적다중PCR확증산물,25 min내즉가완성검측.천이시간적일내상대표준편차위0.92%～1.58%.통과다향응곡면적우화,유효개선료모세관전영대DNA분자적분리능력.
