CAJ | 학술논문

目的利用RNA干扰(RNAi)在人胶质瘤U251细胞中沉默CDKL1(cyclin-dependent kinaselike 1)基因的表达,探讨其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法构建针对CDKL1基因的短发卡(shRNA)慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒并感染人胶质瘤U251细胞,采用实时定量聚合酶链反应和Western印迹法验证CDKL1基因的mRNA和蛋白的表达,确定其抑制效率.采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法和应用Annexin V染色流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况,观察沉默CDKL1基因对U251细胞增殖与凋亡表型的影响.结果 CDKL1-shRNA能有效抑制U251细胞中CDKL1基因的mRNA和蛋白的表达.CDKL1基因沉默后U251各时相的光密度值较感染无义序列的细胞均有降低趋势,第5天时差异有统计学意义(P＜0.05).同时,抑制CDKL1的U251细胞凋亡比例从无义小干扰RNA(siRNA)序列对照组的(9.80±0.21)%上升至(19.26±0.33)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论采用RNAi方法能有效沉默CDKL1基因的表达,同时显著降低U251细胞的增殖能力,促进肿瘤细胞凋亡,表明CDKL1基因可能具有影响胶质瘤发生、发展的作用.
목적 이용RNA간우(RNAi)재인효질류U251세포중침묵CDKL1(cyclin-dependent kinaselike 1)기인적표체,탐토기대종류세포증식화조망적영향.방법 구건침대CDKL1기인적단발잡(shRNA)만병독표체재체,포장성병독과립병감염인효질류U251세포,채용실시정량취합매련반응화Western인적법험증CDKL1기인적mRNA화단백적표체,학정기억제효솔.채용갑기새서기사서(MTT)비색법화응용Annexin V염색류식세포의검측세포증식화조망정황,관찰침묵CDKL1기인대U251세포증식여조망표형적영향.결과 CDKL1-shRNA능유효억제U251세포중CDKL1기인적mRNA화단백적표체.CDKL1기인침묵후U251각시상적광밀도치교감염무의서렬적세포균유강저추세,제5천시차이유통계학의의(P＜0.05).동시,억제CDKL1적U251세포조망비례종무의소간우RNA(siRNA)서렬대조조적(9.80±0.21)%상승지(19.26±0.33)%,차이유통계학의의(P＜0.05).결론 채용RNAi방법 능유효침묵CDKL1기인적표체,동시현저강저U251세포적증식능력,촉진종류세포조망,표명CDKL1기인가능구유영향효질류발생、발전적작용.