CAJ | 학술논문

背景:趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受.目的:构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达.方法:采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体.将CCR7 DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7.采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒(重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒ΔNRF及包膜质粒pVSVG)共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达.结果与结论:实验成功扩增出小鼠CCR7 DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293 FT细胞后,24 h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108 U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒.慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态.结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达.
배경:추화인자수체7(chemokine receptor-7,CCR7)시수돌상세포종외주천이지림파계통발휘작용적최중요적계동화조절자,단미성숙수돌상세포표면불표체CCR7,인차이용휴대CCR7기인적미성숙수돌상세포가이경호지유도면역내수.목적:구건휴대소서CCR7기인적록색형광단백중조만병독재체,관찰기재미성숙수돌상세포중적표체.방법:채용RT-PCR확증소서CCR7기인병극륭지pCR-Blunt재체.장CCR7 DNA편단급IRES-GFP련입만병독전이질립LV-Lac,생성중조만병독질립LV-CCR7.채용지질체전염법장만병독계통3질립(중조만병독질립LV-CCR7、포장질립ΔNRF급포막질립pVSVG)공전염포장만병독,중조만병독감염미성숙수돌상세포,광학현미경관찰세포상태,류식세포술감정CCR7단백적표체.결과여결론:실험성공확증출소서CCR7 DNA편단병극륭지pCR-Blunt재체,아극륭구건만병독표체재체LV-CCR7,경3질립포장계통감염293 FT세포후,24 h우형광현미경하균관찰도록색형광단백양성표체,병독적도위108 U/L이상,획득휴대CCR7기인적중조만병독.만병독과립가유효감염미성숙수돌상세포,형광현미경가견대량GFP단백표체,양성세포체50%,류식세포술검측도CCR7단백표체,LV-CCR7기인수식적미성숙수돌상세포잉보지재미성숙상태.결과증실,실험성공구건휴대소서CCR7기인록색형광만병독재체LV-CCR7,병가재미성숙수돌상세포세포중표체.