烟草科技
煙草科技
연초과기
TOBACCO SCIENCE & TECHNOLOGY
2011年
11期
71-75,78
,共6页
伏颖%吴元华%穆凌霄%赵秀香
伏穎%吳元華%穆凌霄%趙秀香
복영%오원화%목릉소%조수향
烟草靶斑病菌%DNA提取%RAPD%反应体系
煙草靶斑病菌%DNA提取%RAPD%反應體繫
연초파반병균%DNA제취%RAPD%반응체계
采用改良的CTAB法,对16个烟草靶斑病菌菌株进行基因组DNA的提取,所得的DNA样品的OD26o/OD280值在1.76～1.89之间,电泳主带清晰,无弥散、拖尾现象,DNA质量较高.通过单因素和正交设计结合的方法对影响RAPD-PCR反应的主要因子Mg2+,dNTP,引物的浓度和模板DNA,Taq酶的用量进行了优化,建立了适宜于病菌的RAPD分子标记的最佳反应体系.优化的反应体系为:模板DNA 10 ng,Mg2+浓度3.25 mmol/L,dNTP浓度0.175 mmol/L,Taq酶1.4 U,引物浓度0.5 μmol/L,反应体系总体积为25 μL.通过该反应体系可以获得清晰、稳定、特异性的分子标记谱带,扩增结果较好.
採用改良的CTAB法,對16箇煙草靶斑病菌菌株進行基因組DNA的提取,所得的DNA樣品的OD26o/OD280值在1.76～1.89之間,電泳主帶清晰,無瀰散、拖尾現象,DNA質量較高.通過單因素和正交設計結閤的方法對影響RAPD-PCR反應的主要因子Mg2+,dNTP,引物的濃度和模闆DNA,Taq酶的用量進行瞭優化,建立瞭適宜于病菌的RAPD分子標記的最佳反應體繫.優化的反應體繫為:模闆DNA 10 ng,Mg2+濃度3.25 mmol/L,dNTP濃度0.175 mmol/L,Taq酶1.4 U,引物濃度0.5 μmol/L,反應體繫總體積為25 μL.通過該反應體繫可以穫得清晰、穩定、特異性的分子標記譜帶,擴增結果較好.
채용개량적CTAB법,대16개연초파반병균균주진행기인조DNA적제취,소득적DNA양품적OD26o/OD280치재1.76～1.89지간,전영주대청석,무미산、타미현상,DNA질량교고.통과단인소화정교설계결합적방법대영향RAPD-PCR반응적주요인자Mg2+,dNTP,인물적농도화모판DNA,Taq매적용량진행료우화,건립료괄의우병균적RAPD분자표기적최가반응체계.우화적반응체계위:모판DNA 10 ng,Mg2+농도3.25 mmol/L,dNTP농도0.175 mmol/L,Taq매1.4 U,인물농도0.5 μmol/L,반응체계총체적위25 μL.통과해반응체계가이획득청석、은정、특이성적분자표기보대,확증결과교호.
