第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2004年
8期
913-916
,共4页
别俊%孙茂盛%孙强明%郑建平%孙雯佳
彆俊%孫茂盛%孫彊明%鄭建平%孫雯佳
별준%손무성%손강명%정건평%손문가
sunvivin%克隆%基因表达%纯化
sunvivin%剋隆%基因錶達%純化
sunvivin%극륭%기인표체%순화
目的在原核中高效表达及活性鉴定重组人survivin蛋白分子.方法应用RT-PCR的方法得到survivin的cDNA,并构建成pBV220-survivin原核表达质粒,将其导入E.coli B121(Gold)中,诱导表达survivin蛋白.通过DEAE SepharoseFastFlow离子交换柱和Sephacryl S-200分子筛二步柱纯化以获取目的蛋白.用Western blotting检测表达产物.结果PT-PCR产物经测序分析与预期结果完全一致,表达质粒在E.coli B121(Go1d)中得到高效表达,表达的survivin蛋白占总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在.通过离子交换柱和分子筛二步柱纯化及复性后获得的目的蛋白,其纯度达到95%以上.Western blotting证明表达产物具有特异性.结论获得了较高纯度的survivin蛋白,为进一步深入研究该蛋白的细胞凋亡调控功能提供了工具.
目的在原覈中高效錶達及活性鑒定重組人survivin蛋白分子.方法應用RT-PCR的方法得到survivin的cDNA,併構建成pBV220-survivin原覈錶達質粒,將其導入E.coli B121(Gold)中,誘導錶達survivin蛋白.通過DEAE SepharoseFastFlow離子交換柱和Sephacryl S-200分子篩二步柱純化以穫取目的蛋白.用Western blotting檢測錶達產物.結果PT-PCR產物經測序分析與預期結果完全一緻,錶達質粒在E.coli B121(Go1d)中得到高效錶達,錶達的survivin蛋白佔總蛋白含量的30%以上,錶達產物以包涵體的形式存在.通過離子交換柱和分子篩二步柱純化及複性後穫得的目的蛋白,其純度達到95%以上.Western blotting證明錶達產物具有特異性.結論穫得瞭較高純度的survivin蛋白,為進一步深入研究該蛋白的細胞凋亡調控功能提供瞭工具.
목적재원핵중고효표체급활성감정중조인survivin단백분자.방법응용RT-PCR적방법득도survivin적cDNA,병구건성pBV220-survivin원핵표체질립,장기도입E.coli B121(Gold)중,유도표체survivin단백.통과DEAE SepharoseFastFlow리자교환주화Sephacryl S-200분자사이보주순화이획취목적단백.용Western blotting검측표체산물.결과PT-PCR산물경측서분석여예기결과완전일치,표체질립재E.coli B121(Go1d)중득도고효표체,표체적survivin단백점총단백함량적30%이상,표체산물이포함체적형식존재.통과리자교환주화분자사이보주순화급복성후획득적목적단백,기순도체도95%이상.Western blotting증명표체산물구유특이성.결론획득료교고순도적survivin단백,위진일보심입연구해단백적세포조망조공공능제공료공구.
