CAJ | 학술논문

目的:建立并优化白细胞介素1β致大鼠乙酸性胃溃疡复发模型大鼠蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术.方法:实验于2005-04/2006-02在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室、卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室完成.①选用成年SD大鼠60只,雌雄不拘.按随机数字表法分为2组:对照组、模型组,每组30只.采用乙酸复制胃溃疡动物模型及白细胞介素1β复制胃溃疡复发动物模型,正常对照组施予相同的饮食方案.②两组大鼠于复发模型建立成功后24 h禁食,48 h后处死,收集胃组织,在组织样品离体后立即以冰盐水冲洗以去除组织液和血细胞,并于30 min内入液氮速冻,采用化学和高速机械法进行胃组织裂解.采用Amersham Biosciences公司专门针对蛋白质组学研究中的蛋白质抽提方法设计的2DQuant Kit定量试剂盒,从而实现准确的蛋白质定量.为了尽量可能多分离蛋白质,选择pH值范围(pH 3～10)的固相线性24 cm干胶条和125 g/L的均匀SDS聚丙烯酰胺凝胶,采用初始电压为2.5 W/胶电泳30 min,然后以17 W/胶恒功率电泳,直至溴酚蓝指示线到达凝胶底边处停止电泳.结果:以固相pH梯度-IPG胶条(pH 3～10)进行第一向等电聚焦,以SDS均一胶(12.5%)的垂直电泳为第二向,成功地得到了两组大鼠胃组织斑点分布均匀、数目较多的双向凝胶电泳图谱.结论:通过对蛋白质双向凝胶电泳的建立及技术的优化,获得了适合于研究胃溃疡复发蛋白质组差异表达.
목적:건립병우화백세포개소1β치대서을산성위궤양복발모형대서단백질조분석소수적쌍향응효전영기술.방법:실험우2005-04/2006-02재중남대학상아의원중서의결합연구소실험실、위생부종류단백질조학중점실험실완성.①선용성년SD대서60지,자웅불구.안수궤수자표법분위2조:대조조、모형조,매조30지.채용을산복제위궤양동물모형급백세포개소1β복제위궤양복발동물모형,정상대조조시여상동적음식방안.②량조대서우복발모형건립성공후24 h금식,48 h후처사,수집위조직,재조직양품리체후립즉이빙염수충세이거제조직액화혈세포,병우30 min내입액담속동,채용화학화고속궤계법진행위조직렬해.채용Amersham Biosciences공사전문침대단백질조학연구중적단백질추제방법설계적2DQuant Kit정량시제합,종이실현준학적단백질정량.위료진량가능다분리단백질,선택pH치범위(pH 3～10)적고상선성24 cm간효조화125 g/L적균균SDS취병희선알응효,채용초시전압위2.5 W/효전영30 min,연후이17 W/효항공솔전영,직지추분람지시선도체응효저변처정지전영.결과:이고상pH제도-IPG효조(pH 3～10)진행제일향등전취초,이SDS균일효(12.5%)적수직전영위제이향,성공지득도료량조대서위조직반점분포균균、수목교다적쌍향응효전영도보.결론:통과대단백질쌍향응효전영적건립급기술적우화,획득료괄합우연구위궤양복발단백질조차이표체.