听力学及言语疾病杂志
聽力學及言語疾病雜誌
은역학급언어질병잡지
JOURNAL OF AUDIOLOGY AND SPEECH PATHOLOGY
2008年
3期
241-245
,共5页
朱云%孔维佳%夏交%姚琦%郭长凯
硃雲%孔維佳%夏交%姚琦%郭長凱
주운%공유가%하교%요기%곽장개
豚鼠%毛细胞%前庭%膜片钳术%钙成像
豚鼠%毛細胞%前庭%膜片鉗術%鈣成像
돈서%모세포%전정%막편겸술%개성상
目的 探索一种能提供更多数量并更长时间保留豚鼠单离Ⅰ型前庭毛细胞细胞活性的分离方法.方法 将耳廓反射正常的杂色豚鼠48只随机分为胶原酶Ⅳ+常用分离法组(A组)、胰蛋白酶+常用分离法组(B组)、胶原酶Ⅳ+改良分离法组(C组)和胰蛋白酶+改良分离法组(D组),每组12只,分别用0.25%胶原酶Ⅳ和0.05%胰蛋白酶结合文献报道常用液体和改良液体外加机械分离法分离豚鼠前庭Ⅰ型毛细胞,通过光镜、膜片钳、胞内钙成像等方法观察、鉴定和评价Ⅰ的活性.结果 A组平均每耳分离出存活单离Ⅰ型前庭毛细胞25个,3 h后存活细胞约14个,6 h后存活细胞约8个,3 h静息膜电位平均为-55±10 mV,胞内钙离子浓度平均为105±15 nmol/L;B组平均每耳分离开存活单离Ⅰ型前庭毛细胞40个,3 h后存活细胞约19个,6 h后存活细胞约6个,3 h静息膜电位平均为-60±10 mV,胞内钙离子浓度平均为95±10 nmol/L;C组平均每耳分离出存活单离Ⅰ型前庭毛细胞24个,3 h后存活细胞约为17个,6 h后存活细胞约11个,3 h静息膜电位平均为-55±10 mV,胞内钙离子浓度平均为95±15 nmol/L;D组平均每耳分离出Ⅰ型前庭毛细胞42个,3 h后存活细胞约30个,6 h后存活细胞约23个, 3 h静息膜电位平均为-60±10 mV,胞内钙离子浓度平均为90±10 nmol/L,且胞内钙离子浓度更稳定.结论 与传统的胶原酶Ⅳ酶解加机械分离法相比,以胰蛋白酶酶解结合改良式液体外加机械分离技术分离方法简便易行,能提供足够量的存活时间较长的豚鼠单离Ⅰ型前庭毛细胞,适用于对细胞活性要求较高的实验如膜片钳电生理研究等.
目的 探索一種能提供更多數量併更長時間保留豚鼠單離Ⅰ型前庭毛細胞細胞活性的分離方法.方法 將耳廓反射正常的雜色豚鼠48隻隨機分為膠原酶Ⅳ+常用分離法組(A組)、胰蛋白酶+常用分離法組(B組)、膠原酶Ⅳ+改良分離法組(C組)和胰蛋白酶+改良分離法組(D組),每組12隻,分彆用0.25%膠原酶Ⅳ和0.05%胰蛋白酶結閤文獻報道常用液體和改良液體外加機械分離法分離豚鼠前庭Ⅰ型毛細胞,通過光鏡、膜片鉗、胞內鈣成像等方法觀察、鑒定和評價Ⅰ的活性.結果 A組平均每耳分離齣存活單離Ⅰ型前庭毛細胞25箇,3 h後存活細胞約14箇,6 h後存活細胞約8箇,3 h靜息膜電位平均為-55±10 mV,胞內鈣離子濃度平均為105±15 nmol/L;B組平均每耳分離開存活單離Ⅰ型前庭毛細胞40箇,3 h後存活細胞約19箇,6 h後存活細胞約6箇,3 h靜息膜電位平均為-60±10 mV,胞內鈣離子濃度平均為95±10 nmol/L;C組平均每耳分離齣存活單離Ⅰ型前庭毛細胞24箇,3 h後存活細胞約為17箇,6 h後存活細胞約11箇,3 h靜息膜電位平均為-55±10 mV,胞內鈣離子濃度平均為95±15 nmol/L;D組平均每耳分離齣Ⅰ型前庭毛細胞42箇,3 h後存活細胞約30箇,6 h後存活細胞約23箇, 3 h靜息膜電位平均為-60±10 mV,胞內鈣離子濃度平均為90±10 nmol/L,且胞內鈣離子濃度更穩定.結論 與傳統的膠原酶Ⅳ酶解加機械分離法相比,以胰蛋白酶酶解結閤改良式液體外加機械分離技術分離方法簡便易行,能提供足夠量的存活時間較長的豚鼠單離Ⅰ型前庭毛細胞,適用于對細胞活性要求較高的實驗如膜片鉗電生理研究等.
목적 탐색일충능제공경다수량병경장시간보류돈서단리Ⅰ형전정모세포세포활성적분리방법.방법 장이곽반사정상적잡색돈서48지수궤분위효원매Ⅳ+상용분리법조(A조)、이단백매+상용분리법조(B조)、효원매Ⅳ+개량분리법조(C조)화이단백매+개량분리법조(D조),매조12지,분별용0.25%효원매Ⅳ화0.05%이단백매결합문헌보도상용액체화개량액체외가궤계분리법분리돈서전정Ⅰ형모세포,통과광경、막편겸、포내개성상등방법관찰、감정화평개Ⅰ적활성.결과 A조평균매이분리출존활단리Ⅰ형전정모세포25개,3 h후존활세포약14개,6 h후존활세포약8개,3 h정식막전위평균위-55±10 mV,포내개리자농도평균위105±15 nmol/L;B조평균매이분리개존활단리Ⅰ형전정모세포40개,3 h후존활세포약19개,6 h후존활세포약6개,3 h정식막전위평균위-60±10 mV,포내개리자농도평균위95±10 nmol/L;C조평균매이분리출존활단리Ⅰ형전정모세포24개,3 h후존활세포약위17개,6 h후존활세포약11개,3 h정식막전위평균위-55±10 mV,포내개리자농도평균위95±15 nmol/L;D조평균매이분리출Ⅰ형전정모세포42개,3 h후존활세포약30개,6 h후존활세포약23개, 3 h정식막전위평균위-60±10 mV,포내개리자농도평균위90±10 nmol/L,차포내개리자농도경은정.결론 여전통적효원매Ⅳ매해가궤계분리법상비,이이단백매매해결합개량식액체외가궤계분리기술분리방법간편역행,능제공족구량적존활시간교장적돈서단리Ⅰ형전정모세포,괄용우대세포활성요구교고적실험여막편겸전생리연구등.
