西北林学院学报
西北林學院學報
서북림학원학보
JOURNAL OF NORTHWEST FORESTRY UNIVERSITY
2008年
6期
94-97
,共4页
顾婧婧%金则新%李钧敏%李建辉%毕泉鑫
顧婧婧%金則新%李鈞敏%李建輝%畢泉鑫
고청청%금칙신%리균민%리건휘%필천흠
乌药%ISSR%优化%遗传多样性
烏藥%ISSR%優化%遺傳多樣性
오약%ISSR%우화%유전다양성
为了确保ISSR分析的可靠性和重复性,有必要进行ISSR-PCR反应体系的优化.以浙江省天台山乌药(Lindera aggregata)自然种群随机个体的基因组DNA为研究对象,通过对反应体系中的Mg2+浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、Taq DNA聚合酶用量、BSA浓度、引物用量进行筛选和优化,得出了适用于乌药ISSR分析的扩增条件:10μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(200 mmol·L-1 Tris·HCl,PH 8.8,100 mmol·L-1 KCl,1%Triton X-100,100 mmol·L-1(NH4)42S04,20 mmol.L-1MgCl2),0.5U Taq DNA聚合酶,10 ng模板DNA,10 pmol引物,0.4mmol.L-1dNTP.利用优化反应体系从100个ISSR引物中筛选出12个重复性好、稳定性高的引物对20个乌药个体的DNA进行扩增,共得到142个位点,其中,102个为多态位点,多态位点百分率为71.83%,Nei指数为0.284 3,Shannon信息指数为0.415 3,乌药的遗传多样性处于较高水平.
為瞭確保ISSR分析的可靠性和重複性,有必要進行ISSR-PCR反應體繫的優化.以浙江省天檯山烏藥(Lindera aggregata)自然種群隨機箇體的基因組DNA為研究對象,通過對反應體繫中的Mg2+濃度、dNTP濃度、模闆DNA用量、Taq DNA聚閤酶用量、BSA濃度、引物用量進行篩選和優化,得齣瞭適用于烏藥ISSR分析的擴增條件:10μL PCR反應體積,1×Taq酶配套緩遲液(200 mmol·L-1 Tris·HCl,PH 8.8,100 mmol·L-1 KCl,1%Triton X-100,100 mmol·L-1(NH4)42S04,20 mmol.L-1MgCl2),0.5U Taq DNA聚閤酶,10 ng模闆DNA,10 pmol引物,0.4mmol.L-1dNTP.利用優化反應體繫從100箇ISSR引物中篩選齣12箇重複性好、穩定性高的引物對20箇烏藥箇體的DNA進行擴增,共得到142箇位點,其中,102箇為多態位點,多態位點百分率為71.83%,Nei指數為0.284 3,Shannon信息指數為0.415 3,烏藥的遺傳多樣性處于較高水平.
위료학보ISSR분석적가고성화중복성,유필요진행ISSR-PCR반응체계적우화.이절강성천태산오약(Lindera aggregata)자연충군수궤개체적기인조DNA위연구대상,통과대반응체계중적Mg2+농도、dNTP농도、모판DNA용량、Taq DNA취합매용량、BSA농도、인물용량진행사선화우화,득출료괄용우오약ISSR분석적확증조건:10μL PCR반응체적,1×Taq매배투완충액(200 mmol·L-1 Tris·HCl,PH 8.8,100 mmol·L-1 KCl,1%Triton X-100,100 mmol·L-1(NH4)42S04,20 mmol.L-1MgCl2),0.5U Taq DNA취합매,10 ng모판DNA,10 pmol인물,0.4mmol.L-1dNTP.이용우화반응체계종100개ISSR인물중사선출12개중복성호、은정성고적인물대20개오약개체적DNA진행확증,공득도142개위점,기중,102개위다태위점,다태위점백분솔위71.83%,Nei지수위0.284 3,Shannon신식지수위0.415 3,오약적유전다양성처우교고수평.
