西北农林科技大学学报（自然科学版）
西北農林科技大學學報（自然科學版）
서북농림과기대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NORTHWEST SCI-TECH UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND FORESTRY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2008年
9期
11-16
,共6页
单黎然%杨振%安宁%宋振%郭泽坤
單黎然%楊振%安寧%宋振%郭澤坤
단려연%양진%안저%송진%곽택곤
人类泛素SUMO4%重叠延伸PCR%原核表达%蛋白纯化
人類汎素SUMO4%重疊延伸PCR%原覈錶達%蛋白純化
인류범소SUMO4%중첩연신PCR%원핵표체%단백순화
[目的]为人类泛素样小蛋白4(SUM04)多克隆抗体制备和疾病研究奠定基础.[方法]根据Gen-Bank提供的核酸序列,设计7条单链DNA,采用重叠延伸PCR方法,合成SUMO4基因编码区.基因片段经限制性内切酶双酶切,构建到表达载体pGEX-4T-1中.酶切、测序鉴定后,将重组子转染BL21 RIL菌株,表达及纯化融合蛋白.用SDS-PAGE和Western blot检测纯化效果,鉴定表达产物.[结果]成功合成了长度约为280 bp的SUMO4基因,经双酶切鉴定,SUMO4原核表达载体构建成功,插入片段测序正确.GST-SUMO4融合蛋白在终浓度1mmol/L IPTG、28℃诱导5 h后产量达到高峰,SDS-PAGE证实表达产物以可溶形式存在,分子量约为37 ku,GST亲和层析的纯化效果良好,Western blot验证融合蛋白分子量与预期值相符.[结论]SUMO4蛋白在大肠杆菌中高效表达,并以可溶性蛋白形式存在.
[目的]為人類汎素樣小蛋白4(SUM04)多剋隆抗體製備和疾病研究奠定基礎.[方法]根據Gen-Bank提供的覈痠序列,設計7條單鏈DNA,採用重疊延伸PCR方法,閤成SUMO4基因編碼區.基因片段經限製性內切酶雙酶切,構建到錶達載體pGEX-4T-1中.酶切、測序鑒定後,將重組子轉染BL21 RIL菌株,錶達及純化融閤蛋白.用SDS-PAGE和Western blot檢測純化效果,鑒定錶達產物.[結果]成功閤成瞭長度約為280 bp的SUMO4基因,經雙酶切鑒定,SUMO4原覈錶達載體構建成功,插入片段測序正確.GST-SUMO4融閤蛋白在終濃度1mmol/L IPTG、28℃誘導5 h後產量達到高峰,SDS-PAGE證實錶達產物以可溶形式存在,分子量約為37 ku,GST親和層析的純化效果良好,Western blot驗證融閤蛋白分子量與預期值相符.[結論]SUMO4蛋白在大腸桿菌中高效錶達,併以可溶性蛋白形式存在.
[목적]위인류범소양소단백4(SUM04)다극륭항체제비화질병연구전정기출.[방법]근거Gen-Bank제공적핵산서렬,설계7조단련DNA,채용중첩연신PCR방법,합성SUMO4기인편마구.기인편단경한제성내절매쌍매절,구건도표체재체pGEX-4T-1중.매절、측서감정후,장중조자전염BL21 RIL균주,표체급순화융합단백.용SDS-PAGE화Western blot검측순화효과,감정표체산물.[결과]성공합성료장도약위280 bp적SUMO4기인,경쌍매절감정,SUMO4원핵표체재체구건성공,삽입편단측서정학.GST-SUMO4융합단백재종농도1mmol/L IPTG、28℃유도5 h후산량체도고봉,SDS-PAGE증실표체산물이가용형식존재,분자량약위37 ku,GST친화층석적순화효과량호,Western blot험증융합단백분자량여예기치상부.[결론]SUMO4단백재대장간균중고효표체,병이가용성단백형식존재.
