东南大学学报（医学版）
東南大學學報（醫學版）
동남대학학보（의학판）
JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2010年
5期
485-489
,共5页
李石营%兰燕%唐波%华子春
李石營%蘭燕%唐波%華子春
리석영%란연%당파%화자춘
胸腺嘧啶糖苷酶%原核表达%纯化%多克隆抗体
胸腺嘧啶糖苷酶%原覈錶達%純化%多剋隆抗體
흉선밀정당감매%원핵표체%순화%다극륭항체
目的:表达纯化胸腺嘧啶糖苷酶(TDG)蛋白并制备TDG多克隆抗体.方法:PCR扩增小鼠TDG(mTDG)的基因片段并插入pET28a(+)原核表达载体,表达并纯化His-mTDG融合蛋白.用纯化的His-mTDG蛋白免疫兔子产生抗血清,进一步亲和纯化抗血清制备抗TDG的多克隆抗体,并检测分析制备的抗体在Western blotting和免疫荧光分析中的应用.结果:在低温(20 ℃)和低IPTG浓度(0.2 mmol·L-1)时,His-mTDG融合蛋白大部分在可溶上清部分,用亲和层析法分离纯化了His-mTDG蛋白,并用纯化的蛋白制备了兔抗TDG抗体,结果显示制备的抗体能够特异性地在免疫分析中使用.结论:本研究纯化了条带单一的并且具有生物学活性的TDG融合蛋白,制备了具有良好特异性的兔抗TDG抗体,为进一步研究TDG的性质、结构和功能奠定了基础.
目的:錶達純化胸腺嘧啶糖苷酶(TDG)蛋白併製備TDG多剋隆抗體.方法:PCR擴增小鼠TDG(mTDG)的基因片段併插入pET28a(+)原覈錶達載體,錶達併純化His-mTDG融閤蛋白.用純化的His-mTDG蛋白免疫兔子產生抗血清,進一步親和純化抗血清製備抗TDG的多剋隆抗體,併檢測分析製備的抗體在Western blotting和免疫熒光分析中的應用.結果:在低溫(20 ℃)和低IPTG濃度(0.2 mmol·L-1)時,His-mTDG融閤蛋白大部分在可溶上清部分,用親和層析法分離純化瞭His-mTDG蛋白,併用純化的蛋白製備瞭兔抗TDG抗體,結果顯示製備的抗體能夠特異性地在免疫分析中使用.結論:本研究純化瞭條帶單一的併且具有生物學活性的TDG融閤蛋白,製備瞭具有良好特異性的兔抗TDG抗體,為進一步研究TDG的性質、結構和功能奠定瞭基礎.
목적:표체순화흉선밀정당감매(TDG)단백병제비TDG다극륭항체.방법:PCR확증소서TDG(mTDG)적기인편단병삽입pET28a(+)원핵표체재체,표체병순화His-mTDG융합단백.용순화적His-mTDG단백면역토자산생항혈청,진일보친화순화항혈청제비항TDG적다극륭항체,병검측분석제비적항체재Western blotting화면역형광분석중적응용.결과:재저온(20 ℃)화저IPTG농도(0.2 mmol·L-1)시,His-mTDG융합단백대부분재가용상청부분,용친화층석법분리순화료His-mTDG단백,병용순화적단백제비료토항TDG항체,결과현시제비적항체능구특이성지재면역분석중사용.결론:본연구순화료조대단일적병차구유생물학활성적TDG융합단백,제비료구유량호특이성적토항TDG항체,위진일보연구TDG적성질、결구화공능전정료기출.
