广西植物
廣西植物
엄서식물
GUIHAIA
2011年
1期
111-116,123
,共7页
田苗苗%刘艳菊%李敏%周延清%姚换灵%邢延豪
田苗苗%劉豔菊%李敏%週延清%姚換靈%邢延豪
전묘묘%류염국%리민%주연청%요환령%형연호
大豆%反义油酸脱饱和酶基因%根癌农杆菌%烟草%遗传
大豆%反義油痠脫飽和酶基因%根癌農桿菌%煙草%遺傳
대두%반의유산탈포화매기인%근암농간균%연초%유전
使用PCR方法从大豆基因组DNA中扩增出大豆油酸脱饱和酶基因fad2-1,连接到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌JM109菌株.测序后,用DNAstar软件进行同源性比对.然后将正确的序列反向克隆到表达载体pBt,并转化农杆菌菌株LBA4404,经双酶切鉴定和PCR扩增检测,获得具有该基因反向序列的农杆菌工程菌,转化烟草无菌苗叶片外植体,经过组织培养和卡那霉素抗性筛选,获得抗性烟草转化植株共75株,PCR扩增出npt-II基因,RT-PCR检测到大豆反义油酸脱饱和酶基因转录产物和GC-MS测定其油酸含量增加而亚油酸含量降低.结果表明,克隆的fad2-1基因为1196bp,基因序列与NCBI中已发表的基因fad2-1序列蛋白质相似性达到96.7%,反义大豆fad2-1基因在烟草基因组中整合表达.
使用PCR方法從大豆基因組DNA中擴增齣大豆油痠脫飽和酶基因fad2-1,連接到pMD18-T載體中,轉化大腸桿菌JM109菌株.測序後,用DNAstar軟件進行同源性比對.然後將正確的序列反嚮剋隆到錶達載體pBt,併轉化農桿菌菌株LBA4404,經雙酶切鑒定和PCR擴增檢測,穫得具有該基因反嚮序列的農桿菌工程菌,轉化煙草無菌苗葉片外植體,經過組織培養和卡那黴素抗性篩選,穫得抗性煙草轉化植株共75株,PCR擴增齣npt-II基因,RT-PCR檢測到大豆反義油痠脫飽和酶基因轉錄產物和GC-MS測定其油痠含量增加而亞油痠含量降低.結果錶明,剋隆的fad2-1基因為1196bp,基因序列與NCBI中已髮錶的基因fad2-1序列蛋白質相似性達到96.7%,反義大豆fad2-1基因在煙草基因組中整閤錶達.
사용PCR방법종대두기인조DNA중확증출대두유산탈포화매기인fad2-1,련접도pMD18-T재체중,전화대장간균JM109균주.측서후,용DNAstar연건진행동원성비대.연후장정학적서렬반향극륭도표체재체pBt,병전화농간균균주LBA4404,경쌍매절감정화PCR확증검측,획득구유해기인반향서렬적농간균공정균,전화연초무균묘협편외식체,경과조직배양화잡나매소항성사선,획득항성연초전화식주공75주,PCR확증출npt-II기인,RT-PCR검측도대두반의유산탈포화매기인전록산물화GC-MS측정기유산함량증가이아유산함량강저.결과표명,극륭적fad2-1기인위1196bp,기인서렬여NCBI중이발표적기인fad2-1서렬단백질상사성체도96.7%,반의대두fad2-1기인재연초기인조중정합표체.
