中国男科学杂志
中國男科學雜誌
중국남과학잡지
CHINESE JOURNAL OF ANDROLOGY
2011年
6期
3-6
,共4页
漆正宇%崔光辉%郭新%秦洁%张艳敏%桂耀庭%蔡志明
漆正宇%崔光輝%郭新%秦潔%張豔敏%桂耀庭%蔡誌明
칠정우%최광휘%곽신%진길%장염민%계요정%채지명
Stra8基因启动子%视黄酸%间充质干细胞%生殖细胞
Stra8基因啟動子%視黃痠%間充質榦細胞%生殖細胞
Stra8기인계동자%시황산%간충질간세포%생식세포
目的:建立小鼠Stra8基因启动子控制绿色荧光蛋白EGFP表达(P(stra8)-EGFP)的逆转录病毒包装细胞株,以方便地将P(stra8)-EGFP转导到目的细胞,为生殖细胞鉴定分选提供基础.方法:PCR扩增小鼠基因组DNA中的Stra8基因启动子片段,构建Stra8基因启动子控制表达的EGFP报告基因逆转录病毒质粒.将质粒脂质体法转染PT67病毒包装细胞,G418抗性筛选后,梯度稀释法将包装细胞单克隆化并扩增成多个细胞株.以包装细胞培养上清液感染NIH3T3细胞的所形成的G418抗性阳性细胞数定义病毒滴度,确定高滴度病毒包装细胞株.通过染毒小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)验证该细胞株的P(stra8)-EGFP转导效果.结果:所建立的病毒包装细胞株培养上清液滴度达到1.3×10(6) cfu/ml.MSC经包装细胞培养上清液感染后,在(retinoic acid,RA)诱导下能表达EGFP蛋白.结论:成功构建了将P(stra8)-EGFP转导到目的细胞的PT67逆转录病毒包装细胞株.
目的:建立小鼠Stra8基因啟動子控製綠色熒光蛋白EGFP錶達(P(stra8)-EGFP)的逆轉錄病毒包裝細胞株,以方便地將P(stra8)-EGFP轉導到目的細胞,為生殖細胞鑒定分選提供基礎.方法:PCR擴增小鼠基因組DNA中的Stra8基因啟動子片段,構建Stra8基因啟動子控製錶達的EGFP報告基因逆轉錄病毒質粒.將質粒脂質體法轉染PT67病毒包裝細胞,G418抗性篩選後,梯度稀釋法將包裝細胞單剋隆化併擴增成多箇細胞株.以包裝細胞培養上清液感染NIH3T3細胞的所形成的G418抗性暘性細胞數定義病毒滴度,確定高滴度病毒包裝細胞株.通過染毒小鼠骨髓間充質榦細胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)驗證該細胞株的P(stra8)-EGFP轉導效果.結果:所建立的病毒包裝細胞株培養上清液滴度達到1.3×10(6) cfu/ml.MSC經包裝細胞培養上清液感染後,在(retinoic acid,RA)誘導下能錶達EGFP蛋白.結論:成功構建瞭將P(stra8)-EGFP轉導到目的細胞的PT67逆轉錄病毒包裝細胞株.
목적:건립소서Stra8기인계동자공제록색형광단백EGFP표체(P(stra8)-EGFP)적역전록병독포장세포주,이방편지장P(stra8)-EGFP전도도목적세포,위생식세포감정분선제공기출.방법:PCR확증소서기인조DNA중적Stra8기인계동자편단,구건Stra8기인계동자공제표체적EGFP보고기인역전록병독질립.장질립지질체법전염PT67병독포장세포,G418항성사선후,제도희석법장포장세포단극륭화병확증성다개세포주.이포장세포배양상청액감염NIH3T3세포적소형성적G418항성양성세포수정의병독적도,학정고적도병독포장세포주.통과염독소서골수간충질간세포(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)험증해세포주적P(stra8)-EGFP전도효과.결과:소건립적병독포장세포주배양상청액적도체도1.3×10(6) cfu/ml.MSC경포장세포배양상청액감염후,재(retinoic acid,RA)유도하능표체EGFP단백.결론:성공구건료장P(stra8)-EGFP전도도목적세포적PT67역전록병독포장세포주.
