潍坊医学院学报
濰坊醫學院學報
유방의학원학보
JOURNAL OF WEIFANG MEDICAL COLLEGE
2012年
3期
183-185,后插2
,共4页
表皮生长因子受体Ⅲ型变异体%绿色荧光蛋白%转染%舌癌
錶皮生長因子受體Ⅲ型變異體%綠色熒光蛋白%轉染%舌癌
표피생장인자수체Ⅲ형변이체%록색형광단백%전염%설암
目的 构建含有表皮生长因子受体Ⅲ型变异体(EGFRvⅢ)的增强型绿色荧光蛋白表达载体,转染到舌癌Tca8113细胞中,建立稳定表达的细胞系,为研究EGFRvⅢ在舌癌细胞传导通路中的作用奠定实验基础.方法 以从人乳腺癌细胞中提取的总RNA为模板经反转录为cDNA,用RT-PCR的两步法扩增得出含有HindⅢ和Xhol的EGFRvmⅢ目的 基因连接到绿色荧光蛋白pEGFP-N1载体上.将重组质粒通过脂质体转染的方法转染到舌癌细胞中观察,以G418筛选表达目的 基因的单细胞系并通过RT-PCR的方法进行目的 基因的表达水平检测.结果 经过PCR引物扩增得到1218bp基因片段,生物公司测序正确,重组质粒pEGFP-N1-EGFRvⅢ经双酶切分析检测无误;质粒转染舌癌细胞可见荧光信号表达,经过G418筛选后成功获得细胞克隆株.结论 成功构建pEGFP-N1-EGFRvⅢ表达载体,并能够在舌癌细胞中高度表达,为研究EGFRvⅢ在舌癌MAPK传导通路中的作用建立细胞模型奠定了实验基础.
目的 構建含有錶皮生長因子受體Ⅲ型變異體(EGFRvⅢ)的增彊型綠色熒光蛋白錶達載體,轉染到舌癌Tca8113細胞中,建立穩定錶達的細胞繫,為研究EGFRvⅢ在舌癌細胞傳導通路中的作用奠定實驗基礎.方法 以從人乳腺癌細胞中提取的總RNA為模闆經反轉錄為cDNA,用RT-PCR的兩步法擴增得齣含有HindⅢ和Xhol的EGFRvmⅢ目的 基因連接到綠色熒光蛋白pEGFP-N1載體上.將重組質粒通過脂質體轉染的方法轉染到舌癌細胞中觀察,以G418篩選錶達目的 基因的單細胞繫併通過RT-PCR的方法進行目的 基因的錶達水平檢測.結果 經過PCR引物擴增得到1218bp基因片段,生物公司測序正確,重組質粒pEGFP-N1-EGFRvⅢ經雙酶切分析檢測無誤;質粒轉染舌癌細胞可見熒光信號錶達,經過G418篩選後成功穫得細胞剋隆株.結論 成功構建pEGFP-N1-EGFRvⅢ錶達載體,併能夠在舌癌細胞中高度錶達,為研究EGFRvⅢ在舌癌MAPK傳導通路中的作用建立細胞模型奠定瞭實驗基礎.
목적 구건함유표피생장인자수체Ⅲ형변이체(EGFRvⅢ)적증강형록색형광단백표체재체,전염도설암Tca8113세포중,건립은정표체적세포계,위연구EGFRvⅢ재설암세포전도통로중적작용전정실험기출.방법 이종인유선암세포중제취적총RNA위모판경반전록위cDNA,용RT-PCR적량보법확증득출함유HindⅢ화Xhol적EGFRvmⅢ목적 기인련접도록색형광단백pEGFP-N1재체상.장중조질립통과지질체전염적방법전염도설암세포중관찰,이G418사선표체목적 기인적단세포계병통과RT-PCR적방법진행목적 기인적표체수평검측.결과 경과PCR인물확증득도1218bp기인편단,생물공사측서정학,중조질립pEGFP-N1-EGFRvⅢ경쌍매절분석검측무오;질립전염설암세포가견형광신호표체,경과G418사선후성공획득세포극륭주.결론 성공구건pEGFP-N1-EGFRvⅢ표체재체,병능구재설암세포중고도표체,위연구EGFRvⅢ재설암MAPK전도통로중적작용건립세포모형전정료실험기출.
