CAJ | 학술논문

核桃属种质资源丰富,其中多数物种木材材质优良,果实可食,营养丰富,为重要的经济树种.以美国白核桃Juglans cinerea、日本核桃Juglans ailantifolia等为材料,通过改良CTAB方法,从嫩芽、新鲜叶片和干叶片中分别提取核桃基因组DNA,并以此DNA为模板对RAPD-PCR反应体系中的一些重要参数进行摸索和优化试验.结果表明,改良的CTAB法可有效去除细胞内多糖和多酚等杂质对模板DNA的污染,大大提高DNA的数量和质量.优化适合于美国核桃、日本核桃和杂合核桃的RAPD-PCR反应体系为:在20μL的PCR反应体系中,含10ng模板DNA,0.1 mg/mL牛血清蛋白(BSA),0.25 mmol/L dNTPs,3.5 mmol/L Mg2+,l μ L10×Taq DNA聚合酶反应缓冲液,0.5U Taq聚合酶,5.0 mmol/L RAPD引物.RAPD-PCR反应扩增程序为:92℃变性3 min:93℃变性1min,35℃复性1min,72℃延伸1min,35个循环；72℃后延伸10 min,置4℃保存.
핵도속충질자원봉부,기중다수물충목재재질우량,과실가식,영양봉부,위중요적경제수충.이미국백핵도Juglans cinerea、일본핵도Juglans ailantifolia등위재료,통과개량CTAB방법,종눈아、신선협편화간협편중분별제취핵도기인조DNA,병이차DNA위모판대RAPD-PCR반응체계중적일사중요삼수진행모색화우화시험.결과표명,개량적CTAB법가유효거제세포내다당화다분등잡질대모판DNA적오염,대대제고DNA적수량화질량.우화괄합우미국핵도、일본핵도화잡합핵도적RAPD-PCR반응체계위:재20μL적PCR반응체계중,함10ng모판DNA,0.1 mg/mL우혈청단백(BSA),0.25 mmol/L dNTPs,3.5 mmol/L Mg2+,l μ L10×Taq DNA취합매반응완충액,0.5U Taq취합매,5.0 mmol/L RAPD인물.RAPD-PCR반응확증정서위:92℃변성3 min:93℃변성1min,35℃복성1min,72℃연신1min,35개순배；72℃후연신10 min,치4℃보존.