甘肃农业大学学报
甘肅農業大學學報
감숙농업대학학보
JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY
2012年
3期
7-12
,共6页
骆继怀%杨利恒%高闪电%独军政%常惠芸%薛慧文
駱繼懷%楊利恆%高閃電%獨軍政%常惠蕓%薛慧文
락계부%양리항%고섬전%독군정%상혜예%설혜문
口蹄疫病毒%3D基因%非结构蛋白%反应原性分析
口蹄疫病毒%3D基因%非結構蛋白%反應原性分析
구제역병독%3D기인%비결구단백%반응원성분석
采用RT-PCR技术扩增获得口蹄疫病毒(FMDV)细胞毒O/Akesu/58的非结构蛋白3D(NSP 3D)基因编码区,并定向克隆到pProexHTb原核表达载体上,再将重组pProex-3D转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达产物用亲和层析法纯化,经SDS-PAGE鉴定和Western-blot分析抗原性；以纯化的表达蛋白免疫豚鼠制备其多克隆抗体,ELISA测定抗体效价,间接免疫荧光法检测制备的豚鼠抗NSP 3D多克隆抗体与细胞毒天然抗原的反应原性.结果表明:表达的目的蛋白大小为53 ku左右；ELISA结果表明,制备的多克隆抗体效价达1∶1 024以上；Western-blot分析表明,纯化后的蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应；间接免疫荧光检测发现,豚鼠抗3D蛋白多克隆抗体可与细胞毒天然抗原反应,与阴性对照未见反应.
採用RT-PCR技術擴增穫得口蹄疫病毒(FMDV)細胞毒O/Akesu/58的非結構蛋白3D(NSP 3D)基因編碼區,併定嚮剋隆到pProexHTb原覈錶達載體上,再將重組pProex-3D轉化至大腸桿菌BL21,經IPTG誘導,錶達產物用親和層析法純化,經SDS-PAGE鑒定和Western-blot分析抗原性；以純化的錶達蛋白免疫豚鼠製備其多剋隆抗體,ELISA測定抗體效價,間接免疫熒光法檢測製備的豚鼠抗NSP 3D多剋隆抗體與細胞毒天然抗原的反應原性.結果錶明:錶達的目的蛋白大小為53 ku左右；ELISA結果錶明,製備的多剋隆抗體效價達1∶1 024以上；Western-blot分析錶明,純化後的蛋白能與FMDV感染動物血清髮生特異性反應；間接免疫熒光檢測髮現,豚鼠抗3D蛋白多剋隆抗體可與細胞毒天然抗原反應,與陰性對照未見反應.
채용RT-PCR기술확증획득구제역병독(FMDV)세포독O/Akesu/58적비결구단백3D(NSP 3D)기인편마구,병정향극륭도pProexHTb원핵표체재체상,재장중조pProex-3D전화지대장간균BL21,경IPTG유도,표체산물용친화층석법순화,경SDS-PAGE감정화Western-blot분석항원성；이순화적표체단백면역돈서제비기다극륭항체,ELISA측정항체효개,간접면역형광법검측제비적돈서항NSP 3D다극륭항체여세포독천연항원적반응원성.결과표명:표체적목적단백대소위53 ku좌우；ELISA결과표명,제비적다극륭항체효개체1∶1 024이상；Western-blot분석표명,순화후적단백능여FMDV감염동물혈청발생특이성반응；간접면역형광검측발현,돈서항3D단백다극륭항체가여세포독천연항원반응,여음성대조미견반응.
