云南农业大学学报
雲南農業大學學報
운남농업대학학보
JOURNAL OF YUNNAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
2012年
5期
703-707
,共5页
容天聚%文国松%钱雄%查应洪%徐绍忠
容天聚%文國鬆%錢雄%查應洪%徐紹忠
용천취%문국송%전웅%사응홍%서소충
铁皮石斛%多糖%总RNA提取%异硫氰酸胍法%CTAB法
鐵皮石斛%多糖%總RNA提取%異硫氰痠胍法%CTAB法
철피석곡%다당%총RNA제취%이류청산고법%CTAB법
铁皮石斛是我国重点保护药材,因其富含多糖及次生代谢物,用普通的方法难以从叶中提取到能满足构建全长cDNA文库等分子生物学实验对高质量RNA需要的总RNA.分别通过对异硫氰酸胍法和CTAB法进行改良.异硫氰酸胍法:往裂解液中加入PVP,通过PVP去除多酚；用56℃热水水浴5min加速组织细胞裂解；抽提时间由原来15 min缩短为5min；根据材料多糖多酚的多寡情况适当增加裂解液.CTAB法:根据材料多糖多酚的多寡情况适当增加CTAB裂解液；用LiCl对RNA进行选择性过夜沉淀；灵活处理,适当增大LiCl浓度.结果表明用改良后的2种方法均可提取到总RNA,经对比发现,改良CTAB法提取效果更好,可重复性强,抽取到的RNA更适合于后续的分子生物学实验.
鐵皮石斛是我國重點保護藥材,因其富含多糖及次生代謝物,用普通的方法難以從葉中提取到能滿足構建全長cDNA文庫等分子生物學實驗對高質量RNA需要的總RNA.分彆通過對異硫氰痠胍法和CTAB法進行改良.異硫氰痠胍法:往裂解液中加入PVP,通過PVP去除多酚；用56℃熱水水浴5min加速組織細胞裂解；抽提時間由原來15 min縮短為5min；根據材料多糖多酚的多寡情況適噹增加裂解液.CTAB法:根據材料多糖多酚的多寡情況適噹增加CTAB裂解液；用LiCl對RNA進行選擇性過夜沉澱；靈活處理,適噹增大LiCl濃度.結果錶明用改良後的2種方法均可提取到總RNA,經對比髮現,改良CTAB法提取效果更好,可重複性彊,抽取到的RNA更適閤于後續的分子生物學實驗.
철피석곡시아국중점보호약재,인기부함다당급차생대사물,용보통적방법난이종협중제취도능만족구건전장cDNA문고등분자생물학실험대고질량RNA수요적총RNA.분별통과대이류청산고법화CTAB법진행개량.이류청산고법:왕렬해액중가입PVP,통과PVP거제다분；용56℃열수수욕5min가속조직세포렬해；추제시간유원래15 min축단위5min；근거재료다당다분적다과정황괄당증가렬해액.CTAB법:근거재료다당다분적다과정황괄당증가CTAB렬해액；용LiCl대RNA진행선택성과야침정；령활처리,괄당증대LiCl농도.결과표명용개량후적2충방법균가제취도총RNA,경대비발현,개량CTAB법제취효과경호,가중복성강,추취도적RNA경괄합우후속적분자생물학실험.
