HLA-A2肽四聚体的构建及其在乙、丙型肝炎中的初步应用
HLA-A2태사취체적구건급기재을、병형간염중적초보응용
Construction of HLA-A2-peptide tetramer and application in HBV/HCV infection
  • 万方数据
    中华医学杂志 중화의학잡지
    National Medical Journal of China
    2004年 21期 1818-1822 ,共5页

    朴文花%何豫%席宏丽%孙新婷%张恒辉%徐京航%赵鸿%许文燮%李在琉%王贵强

    박문화%하예%석굉려%손신정%장항휘%서경항%조홍%허문섭%리재류%왕귀강

    肝炎病毒,乙型%C 型肝炎样病毒属%HLA-A2抗原%T淋巴细胞,细胞毒性 肝炎病毒,乙型%C 型肝炎樣病毒屬%HLA-A2抗原%T淋巴細胞,細胞毒性
    간염병독,을형%C 형간염양병독속%HLA-A2항원%T림파세포,세포독성
    目的分别构建乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)特异的HLA-A2肽四聚体,为检测乙、丙型肝炎患者体内特异性的细胞毒T细胞(CTL)提供直接、有效的方法,指导临床用药.方法分别构建含有HLA-A2-BSP(含有15个可供识别生物素化的氨基酸位点)和β2微球蛋白(β-2m)基因的原核表达载体,并进行表达、复性、鉴定及纯化.再分别将HBV和HCV特异性短肽与HLA-A2-BSP和β-2m蛋白在体外进行耦合,该复合物经纯化浓缩后进行生物素化.生物素化的产物经纯化浓缩后形成单体,此单体再与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成四聚体,最后进行流式细胞仪检测.结果获得了高效、稳定的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β-2m原核表达载体,表达量分别占菌体的46%和26%左右;纯度达90%以上.构建的四聚体可成功的检测急、慢性乙型和丙型肝炎患者中特异性的CTL,急性HBV感染时CTL占1.84%,慢性HBV感染时CTL占0.02 %～0.68 %,慢性HCV感染的CTL占0.02～0.72%.结论高效、稳定的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β-2m原核表达载体大量的表达可用于构建各种肽特异性的四聚体复合物;在体外构建的MHC -Ⅰ类分子四聚体,为特异性细胞毒T细胞的检测提供有效的工具.
    목적분별구건을형간염병독(HBV)화병형간염병독(HCV)특이적HLA-A2태사취체,위검측을、병형간염환자체내특이성적세포독T세포(CTL)제공직접、유효적방법,지도림상용약.방법분별구건함유HLA-A2-BSP(함유15개가공식별생물소화적안기산위점)화β2미구단백(β-2m)기인적원핵표체재체,병진행표체、복성、감정급순화.재분별장HBV화HCV특이성단태여HLA-A2-BSP화β-2m단백재체외진행우합,해복합물경순화농축후진행생물소화.생물소화적산물경순화농축후형성단체,차단체재여조홍단백표기적련매친화소안일정비례우합구건성사취체,최후진행류식세포의검측.결과획득료고효、은정적pBV220-HLA-A2-BSP화pBV220-β-2m원핵표체재체,표체량분별점균체적46%화26%좌우;순도체90%이상.구건적사취체가성공적검측급、만성을형화병형간염환자중특이성적CTL,급성HBV감염시CTL점1.84%,만성HBV감염시CTL점0.02 %～0.68 %,만성HCV감염적CTL점0.02～0.72%.결론고효、은정적pBV220-HLA-A2-BSP화pBV220-β-2m원핵표체재체대량적표체가용우구건각충태특이성적사취체복합물;재체외구건적MHC -Ⅰ류분자사취체,위특이성세포독T세포적검측제공유효적공구.
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