生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2002年
3期
308-312
,共5页
高川%朱旭东%周晓巍%于芳%卢柏松%黄培堂
高川%硃旭東%週曉巍%于芳%盧柏鬆%黃培堂
고천%주욱동%주효외%우방%로백송%황배당
真核表达载体%突变体%筛选标志基因
真覈錶達載體%突變體%篩選標誌基因
진핵표체재체%돌변체%사선표지기인
新霉素抗性基因(neo)是真核表达载体的常用筛选标志,neo基因编码新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPT Ⅱ),能催化G418、卡那霉素等多种氨基糖苷抗生素分子磷酸化而使之失去抗菌活性.通过对真核表达载体的筛选标志基因neo进行定点突变,以降低NPTⅡ的活性,然后用含neo突变体的真核表达载体pmDNA构建荧光素酶表达质粒,稳定转染CHO-K1细胞,发现表达荧光素酶的阳性细胞比例达到95%,其中高表达细胞集落的筛选率明显高于对照组.
新黴素抗性基因(neo)是真覈錶達載體的常用篩選標誌,neo基因編碼新黴素燐痠轉移酶Ⅱ(NPT Ⅱ),能催化G418、卡那黴素等多種氨基糖苷抗生素分子燐痠化而使之失去抗菌活性.通過對真覈錶達載體的篩選標誌基因neo進行定點突變,以降低NPTⅡ的活性,然後用含neo突變體的真覈錶達載體pmDNA構建熒光素酶錶達質粒,穩定轉染CHO-K1細胞,髮現錶達熒光素酶的暘性細胞比例達到95%,其中高錶達細胞集落的篩選率明顯高于對照組.
신매소항성기인(neo)시진핵표체재체적상용사선표지,neo기인편마신매소린산전이매Ⅱ(NPT Ⅱ),능최화G418、잡나매소등다충안기당감항생소분자린산화이사지실거항균활성.통과대진핵표체재체적사선표지기인neo진행정점돌변,이강저NPTⅡ적활성,연후용함neo돌변체적진핵표체재체pmDNA구건형광소매표체질립,은정전염CHO-K1세포,발현표체형광소매적양성세포비례체도95%,기중고표체세포집락적사선솔명현고우대조조.
