CAJ | 학술논문

采用RT-PCR技术从分泌抗人血管内皮生长因子受体Ⅱ(kinase insert domain-containing receptor,KDR)基因Ⅲ区单克隆抗体Ycom1D3的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL可变区基因,通过重叠延伸拼接(splice-overlap extension)PCR方法在VH和VL基因之间引入柔性短肽(Gly4Ser)3,体外构建Ycom1D3单链抗体基因(Ycom1D3-ScFv),将其克隆至pAYZ表达载体,在大肠杆菌中表达.SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,Ycom1D3-ScFv在E.coli 16C9中获得表达,重组蛋白的相对分子量为30kD,与预期结果一致.表达产物主要以不溶性包涵体形式存在,经过溶解包涵体,TALON 金属亲合层析基质(TALON metal affinity resin)纯化和体外复性过程,获得了高纯度的单链抗体片段.流式细胞分析结果证实该单链抗体可与人脐静脉内皮细胞结合,保留了鼠源单抗与KDR抗原的特异性结合活性.抗KDRⅢ单链抗体基因Ycom1D3-ScFv的成功构建和功能性表达为靶向诊断治疗及进一步基因工程改造奠定了基础.
채용RT-PCR기술종분비항인혈관내피생장인자수체Ⅱ(kinase insert domain-containing receptor,KDR)기인Ⅲ구단극륭항체Ycom1D3적잡교류세포중극륭출VH화VL가변구기인,통과중첩연신병접(splice-overlap extension)PCR방법재VH화VL기인지간인입유성단태(Gly4Ser)3,체외구건Ycom1D3단련항체기인(Ycom1D3-ScFv),장기극륭지pAYZ표체재체,재대장간균중표체.SDS-PAGE화Western-blot분석결과표명,Ycom1D3-ScFv재E.coli 16C9중획득표체,중조단백적상대분자량위30kD,여예기결과일치.표체산물주요이불용성포함체형식존재,경과용해포함체,TALON 금속친합층석기질(TALON metal affinity resin)순화화체외복성과정,획득료고순도적단련항체편단.류식세포분석결과증실해단련항체가여인제정맥내피세포결합,보류료서원단항여KDR항원적특이성결합활성.항KDRⅢ단련항체기인Ycom1D3-ScFv적성공구건화공능성표체위파향진단치료급진일보기인공정개조전정료기출.