现代免疫学
現代免疫學
현대면역학
CURRENT IMMUNOLOGY
2005年
6期
445-449
,共5页
IL-18%RT-PCR%克隆%表达%纯化
IL-18%RT-PCR%剋隆%錶達%純化
IL-18%RT-PCR%극륭%표체%순화
IL-18是IL-1家族成员,与IL-1β相似,IL-18也是以前体形式合成,其成熟和分泌需要Caspase-1的作用.我们正确克隆了小鼠IL-18全长cDNA,并成功构建了真核表达载体pcDNA3-proIL-18,能在真核细胞COS7中得到正确表达;为了得到具有天然N端的成熟IL-18(mIL-18),IL-18 cDNA上Caspase-1的识别位点被转换成Factor Xa的作用位点,并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,IPTG能大量诱导GST-IL-18融合蛋白的可溶性表达,经一步亲和纯化后,能得到30～50 mg融合蛋白/升菌;经过Factor Xa作用融合蛋白,能得到大量(5～8 mg/升菌)、高纯度(＞95%)的mIL-18.与商品化的IL-18相比,所得mIL-18能诱导小鼠脾细胞表达更高水平的IFN-γ,表现出更强的生物学活性,这为进一步在小鼠系统中研究IL-18的功能、人成熟IL-18蛋白的高效表达、纯化以及其后可能的临床应用奠定了基础.
IL-18是IL-1傢族成員,與IL-1β相似,IL-18也是以前體形式閤成,其成熟和分泌需要Caspase-1的作用.我們正確剋隆瞭小鼠IL-18全長cDNA,併成功構建瞭真覈錶達載體pcDNA3-proIL-18,能在真覈細胞COS7中得到正確錶達;為瞭得到具有天然N耑的成熟IL-18(mIL-18),IL-18 cDNA上Caspase-1的識彆位點被轉換成Factor Xa的作用位點,併剋隆到原覈錶達載體pGEX-4T-1中,IPTG能大量誘導GST-IL-18融閤蛋白的可溶性錶達,經一步親和純化後,能得到30～50 mg融閤蛋白/升菌;經過Factor Xa作用融閤蛋白,能得到大量(5～8 mg/升菌)、高純度(＞95%)的mIL-18.與商品化的IL-18相比,所得mIL-18能誘導小鼠脾細胞錶達更高水平的IFN-γ,錶現齣更彊的生物學活性,這為進一步在小鼠繫統中研究IL-18的功能、人成熟IL-18蛋白的高效錶達、純化以及其後可能的臨床應用奠定瞭基礎.
IL-18시IL-1가족성원,여IL-1β상사,IL-18야시이전체형식합성,기성숙화분비수요Caspase-1적작용.아문정학극륭료소서IL-18전장cDNA,병성공구건료진핵표체재체pcDNA3-proIL-18,능재진핵세포COS7중득도정학표체;위료득도구유천연N단적성숙IL-18(mIL-18),IL-18 cDNA상Caspase-1적식별위점피전환성Factor Xa적작용위점,병극륭도원핵표체재체pGEX-4T-1중,IPTG능대량유도GST-IL-18융합단백적가용성표체,경일보친화순화후,능득도30～50 mg융합단백/승균;경과Factor Xa작용융합단백,능득도대량(5～8 mg/승균)、고순도(＞95%)적mIL-18.여상품화적IL-18상비,소득mIL-18능유도소서비세포표체경고수평적IFN-γ,표현출경강적생물학활성,저위진일보재소서계통중연구IL-18적공능、인성숙IL-18단백적고효표체、순화이급기후가능적림상응용전정료기출.
