解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2007年
2期
209-212
,共4页
唐岩%唐军民%战军%刘影%常昕莹%王国涛%单铁英%苏安英
唐巖%唐軍民%戰軍%劉影%常昕瑩%王國濤%單鐵英%囌安英
당암%당군민%전군%류영%상흔형%왕국도%단철영%소안영
电转染%人肝癌细胞RNA%树突状细胞%电转染率%人
電轉染%人肝癌細胞RNA%樹突狀細胞%電轉染率%人
전전염%인간암세포RNA%수돌상세포%전전염솔%인
目的 探讨树突状细胞(DC)电转染的方法、优化条件以及影响DC电转染率和存活率的主要因素.方法 提取人肝癌细胞(Bel 7402) RNA,利用淋巴细胞分离液密度梯度法分离人外周血单个核细胞(PBMC),并通过贴壁法获取单核细胞作为树突状细胞前体(pDC).将pDC置含rhGM-CSF和rIL-4的RPMI-1640培养液内联合培养诱导7d,使之充分分化为未成熟的DC (imDC).应用电穿孔仪(electroporation apparatus)分别将人肝癌细胞总RNA和绿色荧光蛋白(GFP)电转染至imDC,并设定不同的电压、脉冲时间、细胞浓度、温度和电转染缓冲液等条件.荧光镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数.电转染1d后,用0.4%锥虫蓝染色分别计算其电转染率和存活率.结果 当imDC浓度为5×106/ml与40μg的人肝癌细胞总RNA混合,设定电转染仪电压为300V、脉冲时间为500μs时,其电转染率达到最高值,imDC存活率约49.07%.结论 电转染提供了一种使人肝癌细胞RNA电转染至imDC的可行技术.影响imDC电转染率的最主要因素是受体细胞imDC的生长状况、电转染的电压及脉冲时间.
目的 探討樹突狀細胞(DC)電轉染的方法、優化條件以及影響DC電轉染率和存活率的主要因素.方法 提取人肝癌細胞(Bel 7402) RNA,利用淋巴細胞分離液密度梯度法分離人外週血單箇覈細胞(PBMC),併通過貼壁法穫取單覈細胞作為樹突狀細胞前體(pDC).將pDC置含rhGM-CSF和rIL-4的RPMI-1640培養液內聯閤培養誘導7d,使之充分分化為未成熟的DC (imDC).應用電穿孔儀(electroporation apparatus)分彆將人肝癌細胞總RNA和綠色熒光蛋白(GFP)電轉染至imDC,併設定不同的電壓、脈遲時間、細胞濃度、溫度和電轉染緩遲液等條件.熒光鏡下和光鏡下分彆計算綠色熒光暘性細胞數和總細胞數.電轉染1d後,用0.4%錐蟲藍染色分彆計算其電轉染率和存活率.結果 噹imDC濃度為5×106/ml與40μg的人肝癌細胞總RNA混閤,設定電轉染儀電壓為300V、脈遲時間為500μs時,其電轉染率達到最高值,imDC存活率約49.07%.結論 電轉染提供瞭一種使人肝癌細胞RNA電轉染至imDC的可行技術.影響imDC電轉染率的最主要因素是受體細胞imDC的生長狀況、電轉染的電壓及脈遲時間.
목적 탐토수돌상세포(DC)전전염적방법、우화조건이급영향DC전전염솔화존활솔적주요인소.방법 제취인간암세포(Bel 7402) RNA,이용림파세포분리액밀도제도법분리인외주혈단개핵세포(PBMC),병통과첩벽법획취단핵세포작위수돌상세포전체(pDC).장pDC치함rhGM-CSF화rIL-4적RPMI-1640배양액내연합배양유도7d,사지충분분화위미성숙적DC (imDC).응용전천공의(electroporation apparatus)분별장인간암세포총RNA화록색형광단백(GFP)전전염지imDC,병설정불동적전압、맥충시간、세포농도、온도화전전염완충액등조건.형광경하화광경하분별계산록색형광양성세포수화총세포수.전전염1d후,용0.4%추충람염색분별계산기전전염솔화존활솔.결과 당imDC농도위5×106/ml여40μg적인간암세포총RNA혼합,설정전전염의전압위300V、맥충시간위500μs시,기전전염솔체도최고치,imDC존활솔약49.07%.결론 전전염제공료일충사인간암세포RNA전전염지imDC적가행기술.영향imDC전전염솔적최주요인소시수체세포imDC적생장상황、전전염적전압급맥충시간.
