首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2008年
4期
445-450
,共6页
朱宛宛%王淑艳%吴迪%徐艳玲%付琳琳%关云谦%张愚
硃宛宛%王淑豔%吳迪%徐豔玲%付琳琳%關雲謙%張愚
주완완%왕숙염%오적%서염령%부림림%관운겸%장우
人胚胎干细胞%细胞培养%胰酶%Ⅳ型胶原酶
人胚胎榦細胞%細胞培養%胰酶%Ⅳ型膠原酶
인배태간세포%세포배양%이매%Ⅳ형효원매
目的 对比人胚胎干细胞(Hesc)培养过程中不同的酶消化细胞的特点,探讨适合Hesc长期体外培养的消化传代方法.方法 将正常生长在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)滋养层上的Hesc分别用0.05%胰酶-EDTA和Ⅳ型胶原酶消化,重新接种,了解两种酶消化后的细胞存活率、克隆形成数量、细胞产量、冻存.复苏后细胞的存活率以及长期传代后细胞核型情况.结果 用0.05%胰酶-EDTA消化传代后形成的克隆大小均一,每代第3 d可获得碱性磷酸酶(AP)阳性克隆数(21.2±3.5)个/10倍视野,每次传代时Hes细胞产量可达(4.56±1.29)×105/cm2,传代时细胞存活率高达95.60%,经冻存-复苏后也有81.20%细胞存活率.用Ⅳ型胶原酶消化组每代仅可获得低浓度胰酶消化组AP阳性克隆数的一半,克隆大小不均,细胞产量也比低浓度胰酶消化组少,传代时细胞存活率和复苏后细胞存活率和低浓度胰酶组相似.分别用两种酶处理传代十余代,核型均无异常.结论 两种酶消化均适用于Hesc培养,二者作用特点不完全相同,分别适用于不同的实验需要.
目的 對比人胚胎榦細胞(Hesc)培養過程中不同的酶消化細胞的特點,探討適閤Hesc長期體外培養的消化傳代方法.方法 將正常生長在小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)滋養層上的Hesc分彆用0.05%胰酶-EDTA和Ⅳ型膠原酶消化,重新接種,瞭解兩種酶消化後的細胞存活率、剋隆形成數量、細胞產量、凍存.複囌後細胞的存活率以及長期傳代後細胞覈型情況.結果 用0.05%胰酶-EDTA消化傳代後形成的剋隆大小均一,每代第3 d可穫得堿性燐痠酶(AP)暘性剋隆數(21.2±3.5)箇/10倍視野,每次傳代時Hes細胞產量可達(4.56±1.29)×105/cm2,傳代時細胞存活率高達95.60%,經凍存-複囌後也有81.20%細胞存活率.用Ⅳ型膠原酶消化組每代僅可穫得低濃度胰酶消化組AP暘性剋隆數的一半,剋隆大小不均,細胞產量也比低濃度胰酶消化組少,傳代時細胞存活率和複囌後細胞存活率和低濃度胰酶組相似.分彆用兩種酶處理傳代十餘代,覈型均無異常.結論 兩種酶消化均適用于Hesc培養,二者作用特點不完全相同,分彆適用于不同的實驗需要.
목적 대비인배태간세포(Hesc)배양과정중불동적매소화세포적특점,탐토괄합Hesc장기체외배양적소화전대방법.방법 장정상생장재소서배태성섬유세포(MEF)자양층상적Hesc분별용0.05%이매-EDTA화Ⅳ형효원매소화,중신접충,료해량충매소화후적세포존활솔、극륭형성수량、세포산량、동존.복소후세포적존활솔이급장기전대후세포핵형정황.결과 용0.05%이매-EDTA소화전대후형성적극륭대소균일,매대제3 d가획득감성린산매(AP)양성극륭수(21.2±3.5)개/10배시야,매차전대시Hes세포산량가체(4.56±1.29)×105/cm2,전대시세포존활솔고체95.60%,경동존-복소후야유81.20%세포존활솔.용Ⅳ형효원매소화조매대부가획득저농도이매소화조AP양성극륭수적일반,극륭대소불균,세포산량야비저농도이매소화조소,전대시세포존활솔화복소후세포존활솔화저농도이매조상사.분별용량충매처리전대십여대,핵형균무이상.결론 량충매소화균괄용우Hesc배양,이자작용특점불완전상동,분별괄용우불동적실험수요.
