生理学报
生理學報
생이학보
ACTA PHYSIOLOGICA SINICA
2008年
4期
497-503
,共7页
耿进霞%蔡劲松%张敏%李淑琴%孙晓彩%羡晓辉%胡玉燕%李文斌%李清君
耿進霞%蔡勁鬆%張敏%李淑琴%孫曉綵%羨曉輝%鬍玉燕%李文斌%李清君
경진하%채경송%장민%리숙금%손효채%이효휘%호옥연%리문빈%리청군
脑缺血预处理%脑缺血耐受%海马%胶质细胞谷氨酸转运体-1%反义寡核苷酸%大鼠
腦缺血預處理%腦缺血耐受%海馬%膠質細胞穀氨痠轉運體-1%反義寡覈苷痠%大鼠
뇌결혈예처리%뇌결혈내수%해마%효질세포곡안산전운체-1%반의과핵감산%대서
本研究应用胶质细胞谷氨酸转运体-1(glial glutamate transporter-1,GLT-1)的反义寡核苷酸(antisense oligo-deoxynucleotides,AS-ODNs)抑制Wistar大鼠GLT-1蛋白的表达,观察其对脑缺血预处理(cerebral ischemic preconditioning.CIP)增强脑缺血耐受作用的影响,探讨GLT-1在CIP诱导的脑缺血耐受中的作用.将凝闭双侧椎动脉的Wistar大鼠随机分为7组:(1)Sham组:只暴露双侧颈总动脉,不阻断血流;(2)CIP组:夹闭双侧颈总动脉3 min;(3)脑缺血打击组:夹闭双侧颈总动脉8 min;(4)CIP+脑缺血打击组:夹闭双侧颈总动脉3 min作为CIP,再灌注2 d后,夹闭双侧颈总动脉8min;(5)双蒸水组:于分离暴露双侧颈总动脉(但不夹闭)前12 h、后12 h及后36 h右侧脑室注射双蒸水,每次5 μL,其它同sham组;(6)AS-ODNs组:于分离暴露双侧颈总动脉(但不夹闭)前12 h、后12 h及后36 h右侧脑室注射GLT-1 AS-ODNs溶液,每次5 μL,其它同sham组,再根据AS-ODNs的剂量进一步分为9 nmol和18 nmol 2个亚组;(7)AS-ODNs+CIP+脑缺血打击组:于CIP前12 h、后12 h及后36 h右侧脑室注射GLT-1 AS-ODNs溶液,每次5 μL,其它同CIP+脑缺血打击组,根据AS-ODNs的剂量进一步分为9 nmol和18 nmol 2个亚组.Western blot分析法观察GLT-1蛋白的表达,硫堇染色观察海马CA1区锥体神经元迟发性死亡(delayed neuronal death,DND)情况.Western blot分析显示,侧脑室注射GLT-1 AS-ODNs可剂量依赖性地抑制大鼠海马CA1区GLT-1蛋白表达.硫堇染色显示,sham组和CIP组海马CA1区未见明显的DND;脑缺血打击组海马CA1区有明显的DND:预先给予CIP可显著对抗脑缺血打击引起的DND,表明CIP可以诱导海马CA1区神经元产生缺血性耐受,对抗脑缺血打击引起的DND;而在GLT-1 AS-ODNs+CIP+脑缺血打击组,侧脑室注射GLT-1 AS-ODNs后,大鼠海马CA1区出现了明显的DND,表明GLT-1 AS-ODNs通过抑制大鼠GLT-1蛋白表达从而减弱CIP对抗脑缺血打击的神经保护作用.以上结果进一步证实了GLT-1参与CIP诱导的脑缺血耐受.
本研究應用膠質細胞穀氨痠轉運體-1(glial glutamate transporter-1,GLT-1)的反義寡覈苷痠(antisense oligo-deoxynucleotides,AS-ODNs)抑製Wistar大鼠GLT-1蛋白的錶達,觀察其對腦缺血預處理(cerebral ischemic preconditioning.CIP)增彊腦缺血耐受作用的影響,探討GLT-1在CIP誘導的腦缺血耐受中的作用.將凝閉雙側椎動脈的Wistar大鼠隨機分為7組:(1)Sham組:隻暴露雙側頸總動脈,不阻斷血流;(2)CIP組:夾閉雙側頸總動脈3 min;(3)腦缺血打擊組:夾閉雙側頸總動脈8 min;(4)CIP+腦缺血打擊組:夾閉雙側頸總動脈3 min作為CIP,再灌註2 d後,夾閉雙側頸總動脈8min;(5)雙蒸水組:于分離暴露雙側頸總動脈(但不夾閉)前12 h、後12 h及後36 h右側腦室註射雙蒸水,每次5 μL,其它同sham組;(6)AS-ODNs組:于分離暴露雙側頸總動脈(但不夾閉)前12 h、後12 h及後36 h右側腦室註射GLT-1 AS-ODNs溶液,每次5 μL,其它同sham組,再根據AS-ODNs的劑量進一步分為9 nmol和18 nmol 2箇亞組;(7)AS-ODNs+CIP+腦缺血打擊組:于CIP前12 h、後12 h及後36 h右側腦室註射GLT-1 AS-ODNs溶液,每次5 μL,其它同CIP+腦缺血打擊組,根據AS-ODNs的劑量進一步分為9 nmol和18 nmol 2箇亞組.Western blot分析法觀察GLT-1蛋白的錶達,硫堇染色觀察海馬CA1區錐體神經元遲髮性死亡(delayed neuronal death,DND)情況.Western blot分析顯示,側腦室註射GLT-1 AS-ODNs可劑量依賴性地抑製大鼠海馬CA1區GLT-1蛋白錶達.硫堇染色顯示,sham組和CIP組海馬CA1區未見明顯的DND;腦缺血打擊組海馬CA1區有明顯的DND:預先給予CIP可顯著對抗腦缺血打擊引起的DND,錶明CIP可以誘導海馬CA1區神經元產生缺血性耐受,對抗腦缺血打擊引起的DND;而在GLT-1 AS-ODNs+CIP+腦缺血打擊組,側腦室註射GLT-1 AS-ODNs後,大鼠海馬CA1區齣現瞭明顯的DND,錶明GLT-1 AS-ODNs通過抑製大鼠GLT-1蛋白錶達從而減弱CIP對抗腦缺血打擊的神經保護作用.以上結果進一步證實瞭GLT-1參與CIP誘導的腦缺血耐受.
본연구응용효질세포곡안산전운체-1(glial glutamate transporter-1,GLT-1)적반의과핵감산(antisense oligo-deoxynucleotides,AS-ODNs)억제Wistar대서GLT-1단백적표체,관찰기대뇌결혈예처리(cerebral ischemic preconditioning.CIP)증강뇌결혈내수작용적영향,탐토GLT-1재CIP유도적뇌결혈내수중적작용.장응폐쌍측추동맥적Wistar대서수궤분위7조:(1)Sham조:지폭로쌍측경총동맥,불조단혈류;(2)CIP조:협폐쌍측경총동맥3 min;(3)뇌결혈타격조:협폐쌍측경총동맥8 min;(4)CIP+뇌결혈타격조:협폐쌍측경총동맥3 min작위CIP,재관주2 d후,협폐쌍측경총동맥8min;(5)쌍증수조:우분리폭로쌍측경총동맥(단불협폐)전12 h、후12 h급후36 h우측뇌실주사쌍증수,매차5 μL,기타동sham조;(6)AS-ODNs조:우분리폭로쌍측경총동맥(단불협폐)전12 h、후12 h급후36 h우측뇌실주사GLT-1 AS-ODNs용액,매차5 μL,기타동sham조,재근거AS-ODNs적제량진일보분위9 nmol화18 nmol 2개아조;(7)AS-ODNs+CIP+뇌결혈타격조:우CIP전12 h、후12 h급후36 h우측뇌실주사GLT-1 AS-ODNs용액,매차5 μL,기타동CIP+뇌결혈타격조,근거AS-ODNs적제량진일보분위9 nmol화18 nmol 2개아조.Western blot분석법관찰GLT-1단백적표체,류근염색관찰해마CA1구추체신경원지발성사망(delayed neuronal death,DND)정황.Western blot분석현시,측뇌실주사GLT-1 AS-ODNs가제량의뢰성지억제대서해마CA1구GLT-1단백표체.류근염색현시,sham조화CIP조해마CA1구미견명현적DND;뇌결혈타격조해마CA1구유명현적DND:예선급여CIP가현저대항뇌결혈타격인기적DND,표명CIP가이유도해마CA1구신경원산생결혈성내수,대항뇌결혈타격인기적DND;이재GLT-1 AS-ODNs+CIP+뇌결혈타격조,측뇌실주사GLT-1 AS-ODNs후,대서해마CA1구출현료명현적DND,표명GLT-1 AS-ODNs통과억제대서GLT-1단백표체종이감약CIP대항뇌결혈타격적신경보호작용.이상결과진일보증실료GLT-1삼여CIP유도적뇌결혈내수.
