CAJ | 학술논문

背景:目前肝干细胞尚无特异性标志物,从胚胎中建立具有干细胞样特性的肝脏原始细胞群是鉴定及研究肝干细胞的一个可行方法.目的:观察胚胎肝原始细胞表型及生物学特性,寻找肝原始,干细胞候选细胞群.方法:酶消化法分离、培养孕13.5 d的BALB/C小鼠胚胎肝原始细胞,免疫细胞化学染色及免疫荧光染色、Westem blot、RT-PCR法测定AFP/Albumin/CK19/c-Met/E-cadherin等肝干细胞表面标记,以及CD45、CD14、SMA等非肝干细胞标记的表达;相差显微镜及透射电镜观察细胞形态结构;流式细胞仪测定细胞周期分布时相;表皮生长因子加二甲基亚砜诱导分化成熟后行PAS糖原染色.结果与结论:实验成功分离得到纯度较高的干细胞,原代细胞多呈集落样生长,小圆形.细胞周期测定提示细胞多数处于静止期,符合干细胞特点.透射电镜观察细胞核浆比例大,细胞器不成熟,呈现原始细胞特点.流式细胞周期测定结果S期占10.8%,G2/M期占10.6%,无异常DNA含量.PAS染色后阳性对照组肝癌细胞的糖原主要表达在靠近一侧的核周边胞质内,呈强阳性;而胚胎肝前体细胞诱导组,核浆比例大,部分细胞胞质内可见较弱的糖原表达,充满胞质.提示实验初步建立表达AFP+Albumin+CK19+c-Met+E-cadherin+标志的集落样生长的肝原始细胞群,其表达多种干细胞表型,具有未成熟肝干细胞特点.可能作为肝干细胞候选细胞.
배경:목전간간세포상무특이성표지물,종배태중건립구유간세포양특성적간장원시세포군시감정급연구간간세포적일개가행방법.목적:관찰배태간원시세포표형급생물학특성,심조간원시,간세포후선세포군.방법:매소화법분리、배양잉13.5 d적BALB/C소서배태간원시세포,면역세포화학염색급면역형광염색、Westem blot、RT-PCR법측정AFP/Albumin/CK19/c-Met/E-cadherin등간간세포표면표기,이급CD45、CD14、SMA등비간간세포표기적표체;상차현미경급투사전경관찰세포형태결구;류식세포의측정세포주기분포시상;표피생장인자가이갑기아풍유도분화성숙후행PAS당원염색.결과여결론:실험성공분리득도순도교고적간세포,원대세포다정집락양생장,소원형.세포주기측정제시세포다수처우정지기,부합간세포특점.투사전경관찰세포핵장비례대,세포기불성숙,정현원시세포특점.류식세포주기측정결과S기점10.8%,G2/M기점10.6%,무이상DNA함량.PAS염색후양성대조조간암세포적당원주요표체재고근일측적핵주변포질내,정강양성;이배태간전체세포유도조,핵장비례대,부분세포포질내가견교약적당원표체,충만포질.제시실험초보건립표체AFP+Albumin+CK19+c-Met+E-cadherin+표지적집락양생장적간원시세포군,기표체다충간세포표형,구유미성숙간간세포특점.가능작위간간세포후선세포.