水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2011年
2期
210-217
,共8页
孙妍%张亦陈%刘逸尘%王雪惠%王宇凡%耿绪云%孙金生%杨卫军
孫妍%張亦陳%劉逸塵%王雪惠%王宇凡%耿緒雲%孫金生%楊衛軍
손연%장역진%류일진%왕설혜%왕우범%경서운%손금생%양위군
中华绒螯蟹%蜕皮抑制激素基因%组织表达%重组表达%纯化
中華絨螯蟹%蛻皮抑製激素基因%組織錶達%重組錶達%純化
중화융오해%세피억제격소기인%조직표체%중조표체%순화
根据实验室分离自中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的一种蜕皮抑制激素(Molting-inhibiting hormone,MIH)N端氨基酸测序结果设计简并引物,采用RACE方法,首次从中华绒螯蟹眼柄中克隆到蜕皮抑制激素基因全长cDNA(Es-MIH,GenBank登录号:DQ341280),该基因全长为1457 bp,开放阅读框为330 bp,编码110个氨基酸(含有35个氨基酸的信号肽);其成熟肽包含C7-C44、C24-C40和C27-C53三个二硫键,有典型的CHH家族结构域.该cDNA编码的氨基酸序列与地蟹(Gecarcinus lateralis)MIH同源性最高,达到了85%.Northern杂交和半定量RT-PCR显示蜕皮间期成体蟹仅在眼柄中有MIH基因表达,提示该基因的表达具有一定组织特异性.利用pCR(R)T7/NT TOPO(R)TA系统重组表达MIH成熟肽,纯化的重组蛋白得率为0.3 g/L,纯化产物经质谱鉴定为中华绒螯蟹MIH.研究解决了CHH家族神经肽在机体中的表达量少,直接纯化较难的问题,为深入研究MIH的作用机制和在生产上控制中华绒鳌蟹蜕皮和生长奠定了基础.
根據實驗室分離自中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)的一種蛻皮抑製激素(Molting-inhibiting hormone,MIH)N耑氨基痠測序結果設計簡併引物,採用RACE方法,首次從中華絨螯蟹眼柄中剋隆到蛻皮抑製激素基因全長cDNA(Es-MIH,GenBank登錄號:DQ341280),該基因全長為1457 bp,開放閱讀框為330 bp,編碼110箇氨基痠(含有35箇氨基痠的信號肽);其成熟肽包含C7-C44、C24-C40和C27-C53三箇二硫鍵,有典型的CHH傢族結構域.該cDNA編碼的氨基痠序列與地蟹(Gecarcinus lateralis)MIH同源性最高,達到瞭85%.Northern雜交和半定量RT-PCR顯示蛻皮間期成體蟹僅在眼柄中有MIH基因錶達,提示該基因的錶達具有一定組織特異性.利用pCR(R)T7/NT TOPO(R)TA繫統重組錶達MIH成熟肽,純化的重組蛋白得率為0.3 g/L,純化產物經質譜鑒定為中華絨螯蟹MIH.研究解決瞭CHH傢族神經肽在機體中的錶達量少,直接純化較難的問題,為深入研究MIH的作用機製和在生產上控製中華絨鼇蟹蛻皮和生長奠定瞭基礎.
근거실험실분리자중화융오해(Eriocheir sinensis)적일충세피억제격소(Molting-inhibiting hormone,MIH)N단안기산측서결과설계간병인물,채용RACE방법,수차종중화융오해안병중극륭도세피억제격소기인전장cDNA(Es-MIH,GenBank등록호:DQ341280),해기인전장위1457 bp,개방열독광위330 bp,편마110개안기산(함유35개안기산적신호태);기성숙태포함C7-C44、C24-C40화C27-C53삼개이류건,유전형적CHH가족결구역.해cDNA편마적안기산서렬여지해(Gecarcinus lateralis)MIH동원성최고,체도료85%.Northern잡교화반정량RT-PCR현시세피간기성체해부재안병중유MIH기인표체,제시해기인적표체구유일정조직특이성.이용pCR(R)T7/NT TOPO(R)TA계통중조표체MIH성숙태,순화적중조단백득솔위0.3 g/L,순화산물경질보감정위중화융오해MIH.연구해결료CHH가족신경태재궤체중적표체량소,직접순화교난적문제,위심입연구MIH적작용궤제화재생산상공제중화융오해세피화생장전정료기출.
